研究表明药用植物内生真菌能产生与宿主细胞相同或相似的生理活性成分 [14-15]。微生物生长繁殖快、生长周期短，发酵条件不受周围环境的影响，易于改变培养条件来提高代谢产物的产量等特点，所以植物内生真菌代谢产物可以成为药源开发的新途径。

本研究拟对飞蓬草内生真菌Y4(Penicillium dipodomyicola)的培养条件优化，以期为今后深入研究飞蓬草内生真菌Y4的代谢产物和以此开发新药物的生产奠定基础。有利于工业化大规模生产，和药用植物资源的开发利用。

2材料与方法

2。1 菌种

飞蓬草叶部分离得到的内生真菌Y4（Penicillium dipodomyicola）。

2。2主要培养基和试剂的配制

(1)PDA液体培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，水1000mL。将马铃薯去皮切成小块，于锅中加水1000mL煮沸半小时，用双层纱布过滤，取其滤液加糖完全溶解后加水补充至1000mL，PH自然。分装于锥形瓶后，121℃灭菌30分钟。

(2)PDA固体培养基：在PDA液体培养基的基础上加入琼脂20g。

(3)1mol/L盐酸溶液：准确吸取8。33mL的浓盐酸至烧杯中缓慢加水稀释，稀释后移至100mL容量瓶中，定容至刻度线，贴上标签。现配现用。

(4)1mol/L氢氧化钠溶液：准确称取氢氧化钠4g于烧杯中，用冷却后的沸水溶解，

转移至100mL容量瓶中，定容至刻度线，贴上标签。现配现用。

2。3菌体干质量测量方法

以菌体生物量,即菌体干质量为指标。取一毫升菌液加入离心管，然后离心，离心完倒掉上清液，称重，去掉离心管的重量就是湿重。离心后在115℃条件下再烘4个小时即为干重。

2。4孢子悬浮液的制备文献综述

将内生真菌在无菌环境下接种到PDA固体培养基上，28℃左右培养7d后，在超净台上操作，用无菌蒸馏水注入培养皿上，用无菌接种环轻轻地刮菌群表面，使孢子成分洗脱、混匀。 将取得的液体用漏斗无菌滤纸过滤到烧杯中，即得孢子菌悬液。再用血球计数板将孢子菌悬液稀释至1*10个/mL 。

2。5单因素试验 

(1)培养基初始pH。250mL锥形瓶中接入3mL孢子菌悬液，再加入97mL PDA液体培养基，用盐酸溶液和氢氧化钠溶液分别调节pH至5。 5、 6、6。 5、 7和7。 5，温度28℃，摇床转速为200r/min条件下培养7d。

(2)接种量。250mL锥形瓶中分别接入2。5、5、10、15、20mL孢子菌悬液，再依次加入97。5、95、90、85、80mL PDA液体培养基，pH自然，温度28℃，摇床转速为200r/min条件下培养7d。

(3)培养温度。250mL锥形瓶中接入3mL孢子菌悬液，再加入97mL PDA液体培养基，pH自然，分别调节摇床温度为15, 20, 25, 30和35℃，摇床转速为200r/min条件下培养7d。

(4)装液量。250mL锥形瓶中分别接入1。5、3、4。5mL孢子菌悬液，再依次加入48。5、97、145。5mL PDA液体培养基，pH自然，温度28℃，摇床转速为200r/min条件下培养7d