溶酪大球菌 Macrococcus caseolyticus ACCC01681

白色念珠菌 Monilia albican ACCC01380

荧光假单胞菌 Pseudomonas fluorescens ACCC01014

腐生葡萄球菌 Staphylococcus saprophyticus ACCC02687

枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis ACCC19269

注：以上菌种均购买自中国农业科学院农业资源与农业区划研究所菌种中心

1.1.3 培养基

采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

1.2 方法

1.2.1 石榴果皮的溶剂提取

称取粉碎好的干燥的石榴果皮粉末30g，加 75% 乙醇300 mL（即料液比1 : 10），浸泡过夜，90℃ 水浴回流提取 4 h，抽滤。药渣继续加入 75% 乙醇，90℃水浴回流2h，抽滤，合并滤液，50℃ 左右旋蒸掉乙醇溶剂，用蒸馏水定容至 60 mL（加少量 DMSO 助溶，DMSO 终浓度控制为5%），使得中药乙醇提取物水溶液中的生药量为 0.5 g/mL。配好的药液经过 0.22 μm 无菌滤膜过滤除菌，4℃ 冰箱保存备用。

1.2.2 培养基及含药培养基的制备

牛肉膏蛋白胨培养基：称取牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、氯化钠5 g，牛肉膏蛋白胨固体培养基再加琼脂 15 g，加适量蒸馏水溶解，定容至1000 mL，并用1 mol/L NaOH溶液调 pH 值（7.3-7.4），分装于试管或锥形瓶中121℃ 高压灭菌20 min。文献综述

培养基平板的制备：将配好的培养基摇匀趁热分装于 250 mL 三角瓶内，每瓶约 150 mL，瓶口加棉塞，外包牛皮纸，并用线扎紧，121℃ 高压蒸汽灭菌 20 min 后，取出，冷至 50-60℃，在紫外灭过菌的洁净工作台内，摇匀后倒入无菌的 9 cm 培养皿内，每皿 15-20 mL，半开皿盖，通风半个小时左右，直至平板内培养基凝固，无肉眼可见的水滴，合上皿盖，备用。