甘薯的幼苗期、生长期和贮藏期都是发病期,块根和幼苗发病时状况最严重,地上的绿色茎蔓不被感染。带菌的种薯容易变黑腐烂,从而导致甘薯在幼苗期染病,严重的时候幼苗会腐烂或枯死。生长期染病的甘薯生长变弱,叶色变得暗淡,早期会在茎基部长出盖有灰色霉层的病斑,随后黑色刺毛状物和粉状物渐渐产生,病斑变为黑褐色,最终地下部分变黑直至腐烂。贮藏期甘薯发病多,黑褐色病斑的中央略微凹陷,黑色霉状物随后产生,有时产生的是刺毛状物,病变薯块变苦,不宜食用[5]。

目前糖生物工程备受瞩目,在基因工程和蛋白质工程之后最受科学家的青睐。在医药、化工、农业、食品、能源、环保等领域[6]已经有了很多糖生物学的研究应用。自然界中存在的最大的生物量就是糖,生物信息数据库以糖链最大,其中寡糖在以多种多样的形式存在于生物体的各个角落,真核生物的生命过程它都有参加。

壳寡糖又叫几丁寡糖、壳聚寡糖,是将壳聚糖经一些适当的方法如化学降解法、酶解法、物理法、电化学法[7]等降解而成,通过破坏壳聚糖分子的氢键作用,改变链的长短以及晶体结构,获得低分子量的壳寡糖,它是壳聚糖的高级产物,由 D-氨基葡萄糖以 β-1,4-糖苷键连接而成[8]。壳寡糖的聚合度在2~20之间,分子量≤3200 Da,是具有水溶性较好、吸收能力强、安全无毒、生物活性高和较好的生物相容性等优点的低分子量产品,同时具有天然纯净、无杂质、不产生辐射等特点。它具有抑菌[9] 、调控植物生长、防治植物病害、调节人体免疫等功能。壳寡糖是自然界中唯一碱性带正电荷的水溶性低聚糖,是动物性纤维素[10]。壳寡糖的用途非常广泛,在医药、保健品、食品工业、农业、日化、环保、军工业等行业的生产都有参与,被称为生命的“第六要素” [11]。

在食品方面,壳寡糖能够防治病虫害,从而提高水果和蔬菜的产量,用壳寡糖在果蔬上涂膜,利用壳寡糖膜的通透性、阻水性以及壳寡糖本身的抑菌作用,达到对果蔬的保鲜和抗菌防腐的效果,是天然无害的食品防腐保鲜剂。壳寡糖不仅能够抑制植物病原真菌的生长和孢子萌发,还可以诱导病原菌感染的防护机能启动[12],孙辉等研究发现壳寡糖对黄瓜枯萎病菌等的生长和萌发都有不同程度的抑制作用[13],另外,有研究发现壳寡糖的抑菌效果因壳寡糖种类、浓度而异[14]。可见,壳寡糖对甘薯黑斑病菌具有一定的抑制作用。甘薯黑斑病的防治目前以化学防治为主,但农药的反复施用不可避免地带来环境污染与农产品农药残留问题,影响着环境和人类身体健康。而壳寡糖具有绿色、无污染的优点,并且可以诱导植物启动对抗病原菌感染的防护机能,所以壳寡糖对甘薯黑斑病抑制作用的研究对甘薯产业意义深远。本实验通过观察不同条件下生长的甘薯黑斑病菌菌落直径的大小和产孢量的多少,研究壳寡糖对甘薯黑斑病菌的抑制作用,以期通过我的微薄之力让甘薯产业早日采用壳寡糖预防和治疗甘薯黑斑病。文献综述

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验菌:甘薯黑斑病菌

1.1.2 壳寡糖样品:编号327的壳寡糖、编号529的壳寡糖、编号420的壳寡糖、编号824的壳寡糖(购于肇庆长龙生物科技有限公司)

1.1.3 培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)

1.1.4 试剂:蒸馏水、无菌水、1mol/L NaOH溶液、1mol/L HCl溶液

1.1.5 实验仪器:锥形瓶(250mL)、烧杯(1000mL)、玻璃棒、玻璃平皿、磁力搅拌器、转子、电磁炉、电磁炉锅、高压灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、酒精灯、打孔器(6mm)、接种针、移液枪(1000μL和200μL)、涂布棒、离心管(5mL)、电子显微镜、血球计数板等

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