双光子显微成像实验及理论分析研究(3)
4.灵敏度高，在较暗的视野里，标本中的样品可以通过浓度不高的荧光染色显示出来；
1.2.3 激光共聚焦显微镜
1987年第一台激光共聚焦显微镜诞生了，它主要有以下部件构成：能产生特定激光的激光器、检测针孔、激光扫描装置、高数值孔径的光学透镜、高灵敏度的光电倍增管和对整个装置进行控制处理的计算机（见图1.2），其中探测针孔要与入射光的扫描针孔光学共轭，光学透镜要进行色差和像差的消除。
1.2 共聚焦显微镜原理图
共聚焦显微镜的光源一般为激光，由共轭聚焦系统和激光扫描系统两个部分构成。共轭聚焦系统中特定波长的激光经过小孔照射到具有荧光基团或者被染料染色的样本上，荧光基团释放出相应的荧光，荧光沿着原来的光路折返到分色镜，分色镜可以使短波长的光波透射长波长的光波反射，于是激发荧光透射出分色镜经过探测针孔被探测器接收。光路中最为重要的就是入射光经过的照明针孔和探测器前的探测针孔是共轭聚焦的，这一共轭装置使得在焦平面上发射的荧光才可以经过探测器前的小孔而被接收到，阻挡掉了其他区域激发的荧光。扫描系统中以点扫描的方式进行，获得样本在焦平面的荧光图像。同时通过载物台上微控马达的调节，可以使得激光的在不同深度上聚焦。样本的三文图像即是显微镜在X-Y平面的扫描图像和深度Z轴的扫描图像的结合，最终扫描图像呈现在计算机上。
1.2 几种显微镜的比较
决定普通光学显微镜成像清晰度有关的一个主要参数是分辨率，分辨率越高，能区别的两点之间的距离越短，成像越清晰。一般我们都用恰好能够分辨的两点之间的最短距离（ ）来代表显微镜的分辨率