谷氨酸脱氢酶虽然广泛存在于动植物以及微生物体内[16],但就其实际生产应用而言,还存在着有效酶源窄,国内主要依赖进口,成本高,价格昂贵,因此本课题从原材料更广泛的双孢菇和鸭肝着手,进行提取谷氨酸脱氢酶的尝试,如果成功,便可大大的缩减成本。特别是鸭肝,是鸭体内重要的解毒和营养器官,里面含有丰富的营养物质和各种生物活性物质,是提取谷氨酸脱氢酶的理想原材料。同时在实验中所用来处理动物组织提取物的聚乙二醇——硫酸铵法也有较大的实用价值,与常见的丙酮脱脂法相比,操作简单,对酶活还有保护作用。64761
现在对谷氨酸脱氢酶的提取对象大致可分为细菌和动物组织。前者利用谷氨酸发酵工业上应用的产黄色短杆菌GDK-9中克隆的谷氨酸脱氢酶GDH基因,并用它构建了穿梭载体pXMJ19-GDH[10],这为对谷氨酸脱氢酶的理论研究和生产实践奠定了基础。另外还有谷氨酸棒杆菌对于动物组织论文网,主要有猪肝[13]、鸭肝和牛肝等,从这些组织中提取谷氨酸脱氢酶均已有报道,但从原材料来源的广泛程度来看,鸭肝应该最具前景,如能建立高效、简单的提酶工艺,实用价值会较大。
参考文献
[1]王燕,宋香,杨平平,等.谷氨酸产生菌S9114中依赖于NADPH谷氨酸脱氢酶的纯化及性质[J].食品与发酵工业,2003,11(29):5-9.
[2]Baars J, Op den Camp HJM, van der Drift C, Van Griensven LJLD.NAD+-dependent glutamate dephydrogenase of the edible mushroom Agaricus bisporus: biochemical and molecular characterization[J].Mol Gen Genet,1990,261:452-462.
[3]Baars J, Op den Camp HJM, van der Drift C, Sonnenberg ASM, Van Griensven LJLD A review of primary nitrogen metabolism in Agaricus bisporus[J],Cult Mush Res Newslett ,1996,3:1-15.
[4]刘兰英,张应玖,杨平,等.谷氨酸脱氢酶的制备工艺及稳定性研究[J].中国医药工业杂志,1993,24(9).
[5]朱鸿,李想韵,王松,等.鸭肝谷氨酸脱氢酶的纯化与酶学性质研究[J].食品科学,2010,31:19-231.
[6]张玉姣,唐乾,曹洪玉,郑学仿.分子拥挤条件下生物大分子性质研究[J].中国生物工程杂志,2012,32(12):104-109.
[7]McPie P, Ni Y S, Minton A P. Macromolecular crowding stabilizes the molten globule form of apomyoglobin with respect to both cold and beat unfolding. J Mol Biol,2006,361(1):7-10.
[8]李宏君,伊际彤,杨启东.细胞破碎方法简述[J].黑龙江医药,2002,15(2):124.
[9]孟琳,田景振.动物组织蛋白提纯方法的研究进展[J].食品与医药,2009,11-05.
[10]邓培生,刑晨光,谢希贤,等.谷氨酸脱氢酶的克隆及原核表达[C].全国氨基酸技术交流研讨会•论文集,2008.
[11] Frédéric Dubois, Thérèse Tercé - Laforgue, Maria -Begona Gonzalez - Moro, et al . Glutamate dehydrogenase in plants: is there a new story for an old enzyme [ J ].
Plants Physiology and Biochemistry, 2003, 4: 565~576.
[12]乐薇,陆志强.双水相体系萃取木瓜蛋白酶的研究[J].化学与生物工程,2011,28(2)
[13]顾雅君,孙淑琴.从猪肝中提取谷氨酸脱氢酶[J].河北省科学院学报,1991,03.
[14]Jams A Olsen, Chsistian B Enfinsen.The crystallizationand characterization of L - glutamic acid dehydrogenase[J ]. J. Biol . Chem, 1952, 197: 67~80.
[15]Adachi K, Suzuki I. Purification and properties of glutamate synthase from Thiobacillus thioparus. J Bacteriol,1977.129(3):1173-1182.
[16]王燕,宋香,杨平平,等.谷氨酸生产菌S9114中的谷氨酸脱氢酶的研究[J].生物工程学报,2003,11:19-6.