Li Fan等[48]将三苯胺基团与styrylcyanine基团连接起来合成了两个pH探针R11和R12,响应的位置也是吲哚上未取代氮原子的质子化与去质子化,pKa值分别为4。40和4。71,最大发射波长分别为655nm和646nm,能够避开细胞内自发荧光的干扰,它们有着大的斯托克斯位移,良好的灵敏性,选择性和可回复性,MTT试验显示10 μM的浓度对HepG2细胞没有细胞毒性,此探针被成功用于检测C6细胞的酸性细胞器,但是这两个探针的溶解性不够理想,限制了其在生物活体内的应用。Hyeran Lee等[49]用巴比妥酸盐调节debenzoindolation反应和heteroannulation(杂环化)反应合成了一种新颖的近红外pH探针R13,其pKa值为3。5,pH从2增加到9的过程中荧光增强了6倍多,与一般菁类染料对pH识别的方式不同,在酸性条件下的质子化形式、在中性和酸性条件下uracilate及其共振式的去质子化形式如图2。3所示,当分子式中右边两个N上的氢被甲基所取代之后,分子不显示其对pH的敏感性而显示出类似于探针R13的质子化形式下的谱图性质,从而验证了此探针的反应机理。
Shaomin Shuang等[50]开发出了能够对中性环境敏感的pH探针R14,pKa=7。38,适合检测细胞质环境中pH的变化。在pH 6。50~8。20范围内pH值与荧光强度成线性关系,斯托克斯位移达到120nm,发射波长在650nm,能够有效避开生物体自发荧光的干扰。SW480细胞的荧光成像实验说明此探针的水溶性和膜透性较好,能够应用于检测细胞质内中性环境pH值的变化。Meizhen Yin等[51]报导了可以可逆检测极碱性环境的pH探针R15、R16,在碱性环境中探针的荧光会消失,而用酸处理后荧光又会得以恢复,通过NMR和质谱分析可以证明检测机理是氢氧离子对氮杂环的亲和加成反应。