SYBR Premix Ex TaqTM RR420A,TAKARA

Trizol Reagent 15596-026,Ambion

2。4 实验方法

2。4。1 设计路线

2。4。2 实验分组

2。4。2。1 低氧暴露前蔗糖摄入组

选取24只约200g的雄性SD大鼠，将其随机分成3组，每组8只，分别为常氧组（C）、低氧暴露组（H）；预先摄入蔗糖、低氧暴露组（pre-SH）。预先蔗糖摄入处理：给予30%蔗糖溶液4ml，一天两次，连续称量每只大鼠的体重14天，为减少实验人员以及其他因素对动物的影响，于每天9:00开始称量每只大鼠的体重、食物补充和实验室卫生打扫。摄食量统计：第一天给予每只大鼠40g鼠饲料，之后每一天在称量体重的同时对摄食量进行称量,前一日词料重(g)减去当日饲料重(g)即为大鼠一日摄食量。第15天低氧暴露组（H）进行低氧暴露：采用人工低压低氧实验舱低氧暴露处理（低氧暴露24h；氧分压11。3kPa，氧浓度10。8%）。低氧暴露后对大鼠的摄食量、体重进行称重，并测定其活动量和焦虑行为。

2。4。2。2 低氧暴露期间蔗糖摄入组

选取32只约200g的雄性SD大鼠，将其随机分成4组，每组8只，分别为常氧组（C）、低氧暴露组（H）；低氧暴露期间摄入蔗糖组（SH）、常氧摄入蔗糖组（SC）。体重与摄食量称量同上一组。进行低氧暴露：采用人工低压低氧实验舱低氧暴露处理（低氧暴露24h；氧分压11。3kPa，氧浓度10。8%）。低氧暴露期间蔗糖摄入处理：低氧暴露期间给予大鼠同样的24小时不限量的30%蔗糖溶液。低氧暴露后称取（SH）、（SC）的蔗糖溶液摄取量，同时对每组摄食量以及体重进行称重，并对其活动量和焦虑行为进行测定。文献综述

2。4。3行为学实验

24小时低氧应激结束后，立即进行焦虑行为测试，依次为活动性检测的经典行为实验——旷场实验(open-field test, OFT)和高架十字迷宫实验(elevated plus-maze test，EPM)。

2。4。3。1 旷场实验(Open field,OF)

旷场实验用于测试动物的探究行为、活动量（自发活动）和对新的空旷环境的探究能力。在旷场实验中，中央区域对动物来说意味着危险情境，外周格对于大鼠来说就相对安全。在旷场实验中，大鼠旷场箱为四壁黑色，底面用白线（软件：动物运动轨迹跟踪系统）划分面积相等的25块的木质立方体箱，其中，外周边缘的16格称为外周格，内部的9格称为中央格，规格通常为100 cm×100 cm×50 cm。每只大鼠放入测试室的中央格后测试5分钟。焦虑行为的测量是通过穿越格子的总数（跨格数），站立次数，中央区域停留时长和內跨格数等指标来体现的。实验完成后将动物放回饲养笼中。每一只动物测试结束后，用75%的酒精和水对旷场箱进行彻底的清洁来防止上一只动物留下的气味对接下来的动物产生影响。

2。4。3。2高架十字迷宫实验(Elevated plus-maze test，EPM)

高架十字迷宫实验是一种国际上公认的广泛用来测试焦虑行为的动物模型装置[10]。它是由距离地面50cm的十字架迷宫组成的，包含两个封闭臂（50 cm×10 cm×1 cm）和两个开放臂（50 cm×10 cm×30 cm）相互在中央平台（10 cm×10 cm）交叉垂直成十字形状。测试时，老鼠面对着封闭臂放在中央平台上5min。通常测量焦虑行为的指标为进入开放臂次数、开放臂停留时长、探头次数和站立次数等指标来体现的。实验完成后将动物放回饲养笼中。每一只动物测试结束后，用75%的酒精和水对高家十字迷宫进行彻底的清洁来防止上一只动物留下的气味对接下来的动物产生影响。