摘    要 乙酰氨基葡萄糖属于氨基糖类参与机体大分子的合成，承担多种生理功能。透明颤菌是一种能够自身合成血红蛋白的丝状的革兰氏阴性菌，能够提高发酵液的溶氧浓度。

【目的】在能够转化葡萄糖为乙酰氨基葡萄糖的重组大肠杆菌中表达透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla Hemoglobin gene)，改善发酵过程中溶氧状况。【方法】构建重组质粒pBR322-VHb，选择低氧启动子Pvgb-S，转入大肠杆菌，摇瓶发酵验证。采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfonate，SDS)-聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳和紫外可见分光光度法(UV)对于结果测定。【结果】SDS-聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳结果中有同目的蛋白大小相当(约15kDa)的蛋白表达。紫外可见分光光度法测定乙酰氨基葡萄糖及残余氨糖含量，显示重组质粒pBR322-VHb成功转化入大肠杆菌，并表达具有生物活性的透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla Hemoglobin，VHb)。【结论】导入VHb之后对于重组大肠杆菌发酵乙酰氨基葡萄糖产量有所提高。85119

Acetylglucosamine belongs to the amino sugar family, and involves the synthesis of macromolecules with a variety of physiological functions。 Vitreoscilla hemoglobin is a filamentous Gram-negative bacteria, able to synthesize a hemoglobin, which can improve the fermentation solution dissolved oxygen concentration。

[Objective] To express the Vitiloscopy Hemoglobin gene in recombinant Escherichia coli capable of transforming glucose as acetylglucosamine, and to improve the dissolved oxygen in the fermentation process。 [Method] The recombinant plasmid pBR322-VHb was constructed and electrokreated into Escherichia coli and the fermentation culture was verified。 The results were determined by sodium dodecyl sulfonate (SDS) - polyacrylamide gel electrophoresis and UV-Vis spectrophotometry (UV)。 [Results] SDS-polyacrylamide gel protein electrophoresis results in the same protein size (about 15kDa) protein expression。 The results showed that the recombinant plasmid pBR322-VHb was successfully transformed into Escherichia coli and expressed as biologically active Vibrio cholera hemoglobin (VHb)。 [Conclusion] The production of acetylglucosamine was improved after the introduction of VHb for recombinant Escherichia coli。

毕业论文关键词：透明颤菌血红蛋白； 乙酰氨基葡萄糖； 大肠杆菌源Q于W优H尔J论K文M网WwW.youeRw.com 原文+QQ75201.,8766

Keyword: Vitreoscilla hemoglobin； Acetylglucosamine； Escherichia coli

目录

1。引言 4

1。1氨基葡萄糖、乙酰氨基葡萄糖及透明颤菌血红蛋白的简介 4

1。2氨基葡萄糖及其衍生物的药用价值 5

1。3氨基葡萄糖的生产方法 6

1。4本研究目的及其意义 7

1。5本研究的手段机技术路线 7

2。实验部分 8

2。1实验材料及试剂

2。1。1 菌株和质粒 8

2。1。2 仪器设备 7

2。1。3试剂及试剂盒 8

2。2 实验操作方法及步骤 8

2。2。1辅助基因透明颤菌血红蛋白的表达优化及功能验证 10

2。2。1。1透明颤菌血红蛋白基因的密码子优化及启动子的选择 10

2。2。1。2基因合成及克隆 11

2。2。1。3透明颤菌血红蛋白的诱导表达及蛋白电泳检测