柱层析法是一种动态交换的过程，将离子交换剂装入到一根具有一定长度与直径的玻璃(或塑料)管中，形成圆柱形，然后由拄的上端将待纯化的酶液加入，流经柱时，在柱内与离子交换剂发生交换，由于酶分子和杂蛋白对交换剂吸附强弱的不同，因此使二者在吸附与洗脱过程中分离。

（5）凝胶过滤分离法：根据分子大小建立的纯化方法。筛子是人们非常熟悉的常用工具，它有一定数目的筛孔，可将直径大小不同的粒子分开，分子筛也具有类似的性质，不同的是它是将小分子物质阻留，让大分子物质通过而已。凝胶过滤法是以凝胶物质为分子筛，利用蛋白质分子间大小的差异进行分离，凝胶物质是一类具有许多的孔洞的网状立体结构，孔洞的大小可以在制备凝胶时通过控制交联物质的比例来决定。因为凝胶具有一定大小的孔洞，当它与待纯化的酶液接触时，比凝胶孔径大的分子便不能进入胶粒内部，而是直接经过胶粒表面之间的空隙流出；比凝胶孔径小的分子则可以进入胶粒内部，且从一个网眼到另一个网眼，小分子物质由于不断的“绕道”行走导致逐渐被滞留下来。所以凝胶过滤又称排阻层折。分子的大小不同，则滞留程度也就不一样，特别是随着层析柱的加长而愈加明显。聚丙烯酰胺凝腔（Bio—Gel）、交联葡聚糖凝胶（Sephedex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）是目前最常用的凝胶种类。

（6）亲和层析法：基于分子间亲和力的纯化方法称为亲和层析。酶及其底物，底物类似物或竞争性抑制剂通常具有高亲和力并且可以特异性和可逆地形成酶 - 配体复合物，使得如果这样的配体被偶联固定在载体上，则其可以快速且选择性地相应的酶 分离液从溶液中分离出来，从而达到与其他白蛋白分离的目的。 然后如果进一步试图洗涤，在吸附杂质时去除非特异性粘附，则可以进一步纯化，最后可以与配体更亲和，或者改变条件，酶将从 吸附剂然后进行纯化，即亲和洗脱，这种方法分辨率非常高。文献综述

1。11本论文的研究意义和主要内容

1。11。1 研究意义

血栓性疾病由于其残疾，死亡率非常高，已成为人类健康和人身安全生命危重的严重威胁。血栓循环系统异常引起血栓形成栓塞，导致冠心病，脑血栓形成，动脉粥样硬化等疾病。血栓性疾病对个人，家庭和社会造成巨大的物质和精神损失，一直是医学研究的重点和难点。现在临床治疗最常用的溶栓药物有严重的副作用或作用时间短，溶栓能力不够，需要较长时间，大剂量或难以生产，昂贵等因素。因此，迫切需要人类发展的溶栓特异性更好，时间更长，易于生产准备，价格合理的新型溶栓剂。

在目前正在研究的各种各样新型溶栓剂中,砂蚕溶解酶有着许多上述溶栓剂没有的优点,它可以用中国各个地区的沙蚕作为生产原材料,成本比较低,同时易于投入大规模生产。砂蚕溶栓酶在常温下活性等方面都比较稳定,反复冻融等情况对酶活性影响也不是很大,方便其储存运输。

本论文旨在探索砂蚕溶栓酶的提取工艺以及提取工艺优化条件以及沙蚕溶栓酶的活性检测，通过比较不同的蛋白酶提取手段对比溶栓酶的提取率以及溶栓酶在不同提取条件下的活性变化情况！本文所涉及的酶粗提取手段主要有沉淀法和双水相法；溶栓酶的生物活性检测的方法本文主要用Folin-酚法，通过测吸光度间接得出生物活性结果。

1。11。2主要内容

多年来，蛋白酶及其抑制剂的研究已成为热点。 许多研究表明，蛋白酶参与溶栓，血管生成，炎症，受精，蛋白质水解，消化，血液凝固和细胞生长，良好的细胞形态维持等，在许多重要的生命活动中起到至关重要的作用，与许多疾病的发病机理也密切相关。来:自[优.尔]论,文-网www.youerw.com +QQ752018766-