因此，本次研究将针对吉马烯A合成酶的RｘR基序和活性中心疏水区域关键位点R327A和K332G进行研究和改造，提高吉马烯A合成酶催化反应的活性。

1。5  本研究目的及其意义

榄香烯具有低毒、广谱的抗肿瘤活性，但是从植物分离提取这种物质不仅要求高、投料多，而且得率低、耗时长、纯度低。另外，化学合成榄香烯步骤繁琐、要求条件奇刻难以实现工业应用。因此，本研究拟在已阐明的榄香烯天然合成途径的基础上，从该生物合成途径中催化反应的关键酶入手，利用合成生物学技术，将天然合成途径的部分功能模块与宿主自身的部分代谢功能模块在宿主系统内重新组装，构建一条榄香烯前体-吉马烯A的大肠杆菌异源合成途径，并对获得的菌株进行诱导条件优化，本研究中的产物吉马烯在体外可以通过简单重排直接获得榄香烯。本研究的成果将会在提高榄香烯的产品质量、降低其生产成本、提高生产效率，为榄香烯的工业化生物合成提供技术前提。本研究成果将有利于该药物在普通癌症患者中推广，并且将为我国的自主知识产权的抗肿瘤药物产业做出贡献。文献综述

2  实验部分

2。1  实验材料及试剂

2。1。1  菌株、载体和试剂

含有温郁金GAS的DNA的pET-28a载体为本实验室保存

Trans-5α感受态细胞，BL21（DE3）感受态细胞购于北京全式金生物技术有限公司

2。1。2  仪器设备

TU-1810紫外分光光度仪（北京普析通用仪器有限公司）、9426A恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）、BXM-30R立式压力蒸汽灭菌锅(上海博迅实业有限公司）、DK-8D型电热恒温水槽（上海一恒科技有限公司）、DNA扩增仪（北京东胜创新生物科技有限公司）、pH计（德国Sartorius）、DYY-6C型电泳仪（北京六一仪器厂）、THZ-300小型恒温培养摇床（上海一恒科技有限公司）、TOMY MX-305高速冷冻微量离心机（北京海宏瑞达科技有限公司）、TELSTAR AV-100无菌操作台（上海巴玖实业有限公司）、HZ-9612K高温振荡培养箱（太仓市科教器材厂）、岛津GC-2010气相色谱仪（岛津企业管理中国有限公司）。