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1.1.4实验方法
本次研究从河南花田土中筛选分离,得到一株高效生物絮凝剂产生菌。经鉴定,为弯曲芽孢杆菌。以细菌16S rRNA通用引物,对该株弯曲芽孢杆菌的基因组进行PCR扩增,并从pH,碳源和氮源等方面分析该菌株产絮凝剂的最佳条件。
1.1.5絮凝活性的测定方法
⑴在100 ml小烧杯中称取0.3 g高岭土,加入100 mL小烧杯中,加入60 ml去离子水,用玻璃棒搅拌均匀,再加入100 ul提菌液,并再次用玻璃棒搅拌均匀,静置2 min后,取上层液[9]。
⑵在100 ml小烧杯中称取0.3 g高岭土,加入100 ul小烧杯中,加入60 ml去离子水,用玻璃棒搅拌均匀,加入1 ml的CaCl2溶液,CaCl2溶液浓度为1%,再加入100 ul菌液,并再次用玻璃棒搅拌均匀,静置2 min后,取上层液。文献综述
将所取上层清液用紫外分光光度计(UV-7504)测定吸光值OD550,加入高岭土的蒸馏水的吸光值作为空白对照[10]。
将空白对照的的OD550 记作 A,所取上层清液的OD550记作 B[11]。则可得样品的絮凝率的计算为:
F = (A-B)/A × 100%
1.2微生物絮凝剂产生菌的筛选与纯化
1.2.1微生物絮凝剂产生菌的筛选与纯化
将实验样品土壤用无菌水梯度稀释,稀释成浓度分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的样品溶液。将样品溶液涂布在涂布已提前制备的LB培养基上。在恒温培养箱内,在37 ℃的条件下进行倒置培养,培养24 h。
24 h后取出培养基进行观察,此时菌落表面光滑,边缘规整,带有黏性,湿润且扁平。此类菌种为所需要分离的,具有絮凝活性的菌种,挑取分离单独培养。
将稀释平板法所筛选出的菌种,在LB固体培养基上通过四区划线的方法多次筛选,分离纯化,最终得到纯种菌种。将所得菌种富集培养。
1.3菌种总DNA提取
1.3.1实验试剂盒
试剂盒:细菌基因组DNA提取专用试剂盒
型号:离心柱型50preps
厂家:TIANGEN生化科技公司
1.3.2操作步骤 多糖类生物絮凝剂功能菌的挖掘(4):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_78890.html