⑴取出细菌的培养液2-4 ml,10000 rpm离心1 min,离心结束后要去除上清液,再向管中加入200 ul的缓冲液GA,震荡至菌体成悬浮状。
⑵向管中加入20 ul的10 mg/ml Proteinase K溶液,震荡混匀(震混匀标志:液体变得清亮粘稠)。混匀后,向管中加入220 ul的 GB缓冲液,震荡15s,70 ℃环境下放置10 min,此时溶液应变清亮,低速短时间离心,以此来除去管壁内壁上残留的水珠。来!自~优尔论-文|网www.youerw.com
⑶如果出现白色沉淀,可以放置在70 ℃环境下,对后续实验不会产生影响。如果溶液未完全变清亮,则说明细胞没有完全裂解,可能导致所提取的DNA量比较少或不纯。
⑷向管中加入220 ul的无水乙醇,充分混均,震荡15 s,除去管壁内壁上残留的水珠。然后先以12000 rpm的速度离心30 s,将废弃液倒掉,同时将吸附柱放入收集管中。
⑸向吸附柱中先加入无水乙醇,再加入500 ul GD缓冲液,以12000 rpm的速度离心30 s后,将废弃液倒掉,同时将吸附柱放入到相对应的收集管中。
⑹向吸附柱中先加入无水乙醇,再加入600 ul PW漂洗液,以12000 rpm的速度离心30 s,将废弃液倒掉,同时将吸附柱放入到相对应的收集管中。此步骤再重复一次,向吸附柱中先加入无水乙醇,再加入600 ul PW漂洗液,以12000 rpm的速度离心30 s,将废弃液倒掉,同时将吸附柱放入到相对应的收集管中。
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