酵母组蛋白提取方法的优化与探索(10)
时间:2017-02-10 20:02 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
WT1 WT2 H2O 3-OH M WT1 WT2 H2O 3-OH M 图（3）曝光后的组蛋白条带—H3-HRP抗体 图（4）曝光后的组蛋白条带—3-OH抗体 经过计算机IMAGE J 图像软件曝光后的组蛋白条带为上两图。H3-HRP抗体主要用于调整上样量，从而使结果更具对比性和说服性。而3-OH抗体主要用于显示给酵母组蛋白细胞加过药之后和加过蒸馏水之后的现象对比。WT1的上样量是15μl,WT2的上样量是20μl,所以从图（3）中可以看出，第二条Wild-type组蛋白的信号强度较之于第一条Wild-type组蛋白的信号强度有明显增加。即曝光的信号强度随着上样量的增加而变强。而从图（4）中，加蒸馏水和加3-OH药的上样量都为18μl,但此图中3-OH的组蛋白条带信号显著增强。即说明，酵母细胞经过上药并且经过一夜再次生长繁殖培育之后，它的组蛋白条带较之没有加过药的组蛋白，条带信号更加清晰。从而达到了对比的效果。 4.2 数据记录 表① 第一次实验测量酵母组蛋白OD值 sample 初始OD值 90min后 2h15min后 3h40min后 Wild-type 1 1.991 0.099 0.057 0.022 Wild-type 2 2.083 0.088 0.048 0.021 Wild-type 3 2.041 1.486 0.694 0.034 H2O 1.868 0.977 0.506 0.318 3-OH 1.981 0.929 0.553 0.354 表② 第二次实验测量酵母组蛋白OD值 sample 初始OD值 2h13min后 Wild-type 1 0.538 0.011 Wild-type 2 0.495 0.006 Wild-type 3 0.720 0.014 H2O 0.897 0.080 3-OH 0.923 0.016 表③ 第三次实验测量酵母组蛋白OD值 sample 初始OD值 2h后 3h15min后 Wild-type 1 1.240 0.041 0.003 Wild-type 2 1.181 0.041 0.029 H2O 1.281 0.063 0.059 3-OH 1.442 0.729 0.341 表④ 第四次实验测量酵母组蛋白OD值 sample 初始OD值 3h后 Wild-type 1 1.490 0.039 Wild-type 2 1.513 0.078 H2O 1.263 0.264 3-OH 1.453 0.405 OD是optical density（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，也称为吸光度，是分子生物科学检测方法里的专有名词，检测单位用OD值表示，OD=lg（1/trans），其中trans为检测物的透光值。需要注意的是，上述表格中wild-type 1 、wild-type 2、wild-type 3 是在相同条件下培养的酵母组蛋白细胞，其OD值的不同取决于组蛋白细胞量的多少，即培养时间过长，酵母在培养基中生长较多，OD值可能会根据此而导致初始值不同。但在提取过程中，必定会带有量的损失。但更关键，最主要的是组蛋白细胞裂解后的OD值需小于初始值的10%。在加入适当的细胞裂解酶，并经过一定时间的裂解后，第二次测量若没有达到要求的数据，即说明细胞并没有完全裂解完毕。需继续放置在30℃恒温水浴中裂解。一般认为，是否达到要求数值取决于两点：酶的数量和裂解时间，通常在酵母组蛋白细胞裂解实验中，使用的酶是60μl，时间是1h-2h，但通常第二次测量几乎达不到要求。所以，在此基础上，延长裂解时间，这并没有具体的要求，可自行进行调整。由于此步骤为提取组蛋白实验的第一步，且要求较高，所花时间较长，辅导老师建议，可以不用严格执行，因为这一步对最后结果的影响并不大，但表格上用红色注明的数据表示是没有达到要求的，但对后续实验步骤没有主要影响。 (责任编辑：qin) |