铜（Cu）是重要的微量元素，可参与构成多种人体必需的酶[3]。铜污染严重的土地会产生土壤微生物群落变化、作物生长缓慢、产量降低等问题。当铜在人体内大量富集时，则会导致人体肝坏死、高铁血红蛋白症以及高铜症等，危害人体健康[4]。

锌（Zn）也是重要的营养元素，是机体新陈代谢所必需的物质之一[5]。矿产开采和冶炼加工会使锌进入土壤环境，机械制造以及镀锌生产、仪器仪表、有机合成和造纸等工业排放也会造成锌污染[6]。研究表明人体锌的含量过高会引起中毒、胃肠炎、贫血、胰腺损伤，降低人体免疫功能，导致体内多元系统功能紊乱甚至死亡[7]。

相较于传统物理、化学修复方式的投资昂贵、程序复杂等缺点[8]，微生物修复重金属污染的方法具有效率更高、成本低等优点[9]，逐渐受到重视而兴起。微生物主要是通过其代谢作用及代谢产物，促进土壤中重金属的溶解，加强植物根系吸收重金属元素等方式进行修复[10]。而进行微生物修复的前提是拥有高效的功能菌株。因此，有针对性的筛选抗铜菌株和抗锌菌株，研究其耐受重金属的机制，对于土壤重金属污染的治理具有重要的意义

本研究从采自江苏省高邮市某电缆厂厂区的土壤中筛选出耐受较高浓度重金属Cu的菌株L-6，从采自江苏省高邮市某炼锌厂污泥中筛选出对重金属Zn具有较强抗性的菌株D-2。研究两株菌株菌落形态、生理生化指标以及重金属耐受性。可为重金属污染土壤的修复提供更多的资源。

1。材料与方法

1。1。供试土样

江苏省高邮某电缆厂厂区土壤和高邮市工业区某炼锌厂厂区生产线附近的土壤，表层土壤100g，多点取样，装入封口袋保存。

1。2。培养基及试剂 

LB培养基：蛋白胨10 g·L-1，酵母粉5。0 g·L-1，NaCl 5。0 g·L-1。加入15 g·L-1琼脂粉可制成固体培养基。

Cu2+浓度为40 g·L-1的母液：CuSO4·5H2O 156。25 g·L-1。

Zn2+浓度为130 g·L-1的母液：ZnSO4·7H2O 574 g·L-1。

1。3。主要仪器

可控温摇床、可控温培养箱、5415R小型高速离心机（Eppendorf）、LS-TP96 PCR仪、分光光度计、电泳仪、电子分析天平、立式压力蒸汽灭菌锅等。

1。4。

重金属抗性菌株的筛选及纯化

制备土样菌悬液：取90 mL无菌水的试管，加入10 g土样，置于150 r/min的摇床中，恒温30 ℃，振荡培养1d。梯度浓度稀释，取1 mL菌悬液加入含有9 mL无菌水的试管中，作为10-1倍稀释，依次进行从10-1~10-7的梯度稀释。取10-4~10-7 ，4个梯度浓度，分别摇匀后取200 μL涂布与Cu2+离子浓度为200 mg·L-1的LB固体培养基平板和Zn2+浓度为650 mg·L-1的LB固体培养基平板上，于30 ℃恒温培养箱中倒置培养3d。从培养3d后的平板上选取生长状况良好的不同菌落进行编号，在LB固体培养基上进行划线、纯化，放置在培养箱中，恒温30 ℃，倒置培养3d，获得单菌。

1。5。菌株对Cu2+和Zn2+的耐受性验证论文网

选取初步筛选后挑选的菌液100 μL，分别加入含Cu2+离子浓度为400 mg·L-1、500 mg·L-1、600 mg·L-1的3 mL LB液体培养基的试管中。恒温30 ℃，摇床培养3d后，测OD600。

选取初步筛选后挑选的菌液100 μL，分别加入含Zn2+离子浓度为975 mg·L-1、1300 mg·L-1、1625 mg·L-1的3ml LB液体培养基的试管中。恒温30 ℃，摇床培养3d后，测OD600。

1。6。抗性菌株的形态学与生理生化鉴定

将筛选到的菌株接种到LB固体培养基，划线培养，30℃恒温培养箱中倒置培养3d。鉴定菌株形态特征和各种生理生化鉴定的方法根据《常见细菌系统鉴定手册》[11]进行。