NADH氧化酶的固定化研究+文献综述(2)
2.4.1 菌株形态特征 9
2.4.2 16S rDNA鉴定结果 10
2.4.3 荧光鉴定大肠杆菌实验结果 10
2.4.4 产气型鉴定 10
2.5 本章小结 11
3 H2菌的发酵条件探索 12
3.1 引言 12
3.2 实验材料 12
3.2.1 菌种 12
3.2.2 主要试剂 12
3.2.3 培养基 13
3.3 实验方法 13
3.3.1 菌体生长曲线测定 13
3.3.2 发酵时间对NADH氧化酶酶活的影响 13
3.4 实验结果 14
3.4.1 H2菌体生长曲线 14
3.4.2 发酵时间对粗酶酶活影响 14
3.4 本章小结 15
4 NADH氧化酶的分离纯化 16
4.1 实验原理 16
4.1.1 细胞破碎提取粗酶原理 16
4.1.2 硫沉的原理 16
4.1.3 分子筛柱层析原理 16
4.1.4 DEAE纤文素柱层析原理 17
4.1.5 亲和柱层析原理 17
4.1.6 SDS-PAGE电泳原理 17
4.1.7 NADH氧化酶酶活和蛋白含量测定原理 17
4.2 实验材料 18
4.2.1 实验仪器 18
4.2.2 主要试剂 18
4.3 实验方法 19
4.3.1 菌体细胞破碎 19
4.3.2 硫沉及分子筛去离子 19
4.3.3 离子柱 20
4.3.4 亲和柱 20
4.3.5 酶活及蛋白含量测定 21
4.3.6 SDS-PADE电泳 22
4.4 实验结果 22
4.4.1 离子交换层析分离纯化结果 22
4.4.2 亲和层析分离纯化结果 23
4.4.3 NADH氧化酶分离提纯结果 23
4.4.4 SDS-PAGE电泳结果 24
4.5 本章小结 26
5 NADH氧化酶的酶学性质研究 28
5.1 引言 28
5.2 实验材料 28
5.2.1 实验仪器 28
5.2.2 主要试剂 28
5.3 实验方法 29
5.3.1 最适pH 29
5.3.2 最适温度 30
5.3.3 二价金属离子对酶活影响，探究NADH氧化酶中巯基的存在 30
5.3.4 产物鉴定 30
5.4 实验结果 32
5.4.1 最适pH 32
5.4.2 最适温度 33
5.4.3 酶的化学抑制剂和激活剂探究 34
5.4.4 产物H2O2鉴定 35
5.5 本章小结 35
6 固定化研究 37
6.1 引言 37
6.2 实验材料 37
6.2.1 实验仪器 37
6.2.2 主要试剂 37
6.3 实验原理及方法 38
6.3.1 固定化载体的制备 38
6.3.2 固定化酶的制备 38
6.3.3 固定化酶的活性检测 39
6.4 实验结果 39
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