1。2。2 鼠李糖苷酶的研究进展 5

1。3 酵母表面展示技术 6

1。3。1 酵母表面展示系统 6

1。3。2 细胞表面展示技术 7

1。3。3 酵母表面展示的优势 8

1。3。4 细胞表面展示研究进展 9

1。4 异槲皮苷的酶法合成 9

1。4。1 异槲皮苷简介 9

1。4。2 传统酶法合成异槲皮苷研究进展 10

1。5 实验目的与方法 11

1。5。1 实验目的 11

1。5。2 研究内容 12

1。5。3 技术路线图 12

第二章 实验材料和方法 13

2。1 实验药品与仪器 13

2。1。1 实验材料 13

2。1。2 实验药品 13

2。1。3 实验仪器 14

2。2 实验方法 14

2。2。1 试剂的配制 14

2。2。2 构建重组酿酒酵母菌株EBY100-pYD1-rhA 16

2。2。3 重组菌株的验证 18

2。2。4 鼠李糖苷酶基因的诱导表达 19

2。2。5 鼠李糖苷酶的酶活检测 19

2。2。6 HPLC测定芦丁和异槲皮苷 20

2。2。7 生物转化体系的优化 20

第三章 结果与讨论 21

3。1 构建重组酿酒酵母菌株EBY100-pYD1-rhA 21

3。1。1 构建重组菌株 21

3。1。2 重组质粒pYD1-rhA的验证 22

3。1。3 重组酿酒酵母菌株的培养 23

3。1。4 小结 24

3。2 制备全细胞催化剂 25

3。2。1 鼠李糖苷酶的诱导表达 25

3。2。2 表面展示鼠李糖苷酶的全细胞催化剂的制备 27

3。2。3 目的基因表达情况测定 28

3。2。4 小结 29

3。3 鼠李糖苷酶催化转化体系的优化 29

3。3。1 pH 值对鼠李糖苷酶酶活性质的影响 29

3。3。2 温度对鼠李糖苷酶酶活性质的影响 30

3。3。3 时间对鼠李糖苷酶酶活性质的影响 31

3。3。4 小结 32

3。4 α-L-鼠李糖苷酶催化芦丁水解生成异槲皮苷 33

3。4。1  芦丁标品的HPLC测定及分析 33

3。4。2  异槲皮苷和槲皮素标品的HPLC测定及分析 33

3。4。3 全细胞催化剂催化产物的HPLC测定及分析 34