参考文献 31

致谢 32

引言

甲醛（HCHO）俗称蚁醛，是一种无色、有刺激气味的气体，其化学性质活泼、易溶于水、醇和醚等化合物，具有强烈的毒性，可经呼吸道吸收，广泛存在于自然界和人类的生活环境中[1]。

矮牵牛(Petunia hybrida)是茄科，矮牵牛属，多年生草本，因为其具有生长快、周期短、易移栽易成活等优点被作为一种极具有代表性的实验模式生物，也是一种模式观赏植物[2]。植物在生长过程中，外界环境中的一些胁迫因子如：温度、高盐、甲醛气体、苯系物等，都能够引起植物体内的生理机制、生长繁殖、相关信号转导、代谢调节途径等过程的变化，最终导致植物的生长发育与功能减弱[3]。From~优E尔L论E文W网wWw.YoUeRw.com 加QQ7520.18766

经过逆境胁迫后，植物体内的代谢途径与机制发生了变化，这一系列的过程，我们怎么更清楚的了解呢，近年来可以利用基因表达谱挖掘重要的功能性基因，揭示优良性状的分子机制，还可以研究不同器官、不同环境胁迫下基因表达的差异在没有完整基因组序列的前提下，分析所有的mRNA转录本的丰度信息，发掘新的转录本，为开展不同生物功能基因组学研究提供了全新的思路[4,5,6]。转录组测序技术发展比较迅速，已被广泛应用于人类、动物，植物及微生物中[7]，利用转录组测序技术可以应用于测定物种的基因组序列[8,9]，可以测定极端微生物的生活方式[10]，可以发现一些具有特殊功能的基因[11]，而且可以比较不同品种之间的差异，还可以比较同一个物种，不同条件下基因的差异性[12]。根据转录组测序数据进行基因功能注释及差异性性基因表达分析[13,14]，还可以进一步对代谢通路中有关键作用的基因或者酶、蛋白质等进行功能注释及表达量分析[15,16]本研究拟利用转录组测序技术，对甲醛处理前后的矮牵牛进行表达谱的分析，探究矮牵牛对甲醛胁迫的分子应答响应机理。论文网

1 材料与方法

1。1 实验材料

矮牵牛（杭州师范大学5号实验楼组培室），本研究是选择生长周期在8-9个周，生长状态相同的无菌组培苗。

1。2 方法

1。2。1。 MS固体培养基的配置

（1）用电子天平称取2。37g不含琼脂和蔗糖的MS培养基粉末放入500mL容量的搪瓷烧杯中。（2）量取500mL蒸馏水，称取15g蔗糖倒入搪瓷烧杯中搅拌均匀至无颗粒状沉淀。（3）用酸度仪将培养基PH调至5。8-5。9。（4）称取3g琼脂粉末倒入调好PH的培养基中并放到电炉上进行加热并搅拌至琼脂完全溶解。（5）将培养基分装到洗净的培养瓶中，每瓶装20~30mL的培养基。（6）将分装好的培养瓶和其他后续实验需要的无菌蒸馏水、空锥形瓶、剪刀、镊子、滤纸等一起放入高压蒸汽灭菌锅高温灭菌25分钟。文献综述

1。2。2 矮牵牛无菌苗的获得和处理   

（1）摘取矮牵牛的外植体，自来水冲洗干净。（2）用加有少量洗洁精的自来水浸泡矮牵牛的外植体5分钟。（3）用稀释5倍的次氯酸钠（安替福民）浸泡消毒10—12分钟。（4）倾倒消毒液后，用无菌水冲洗外植体3—5次。（5）用灭完菌的剪刀将外植体剪切为长约1cm的小段，接种于已灭完菌凝固的固体培养基上，每瓶接种3—4个。（6）将已接种好的矮牵牛培养瓶标注好名称日期，放入组织培养间培养。（7）配置15mg/L的甲醛溶液。（8）将已成活的矮牵牛组培苗均分成2组，用棉花球浸取已配置好的甲醛溶液放入其中一组无菌苗的培养瓶中，每个培养瓶中放入一个棉花球。（9）将甲醛处理的矮牵牛组培苗放置于组织培养间24小时，如图1，12 h白光处理，12 h黑暗处理。