3。1。1 DNA采集 8

3。1。2 DNA提取 8

3。1。3 Thermo ND2000C测量DNA浓度 9

3。2 引物设计 10

3。3 聚合酶链式反应（PCR） 10

3。3。1步 骤： 10

3。3。2 PCR反应体系（30ul） 12

3。4 琼脂糖凝胶电泳 12

四． 实验结果 13

4。1小鼠特性与实验规范 13

4。1。1 小鼠的特点 13

4。1。2 饲养From优T尔K论M文L网wWw.YouERw.com 加QQ75201^8766 管理要求 15

4。1。3 小鼠基本操作技术 15

4。2 琼脂糖凝胶电泳成像分析 16

五． 总 结 17

参考文献 17

致    谢 18

一． 引 言

1。1 背景介绍

    小鼠的 Sox2基因存在小鼠的第3 号染色体上。研究发现，Sox2和大多数Sox基因一样是单外显子结构，并且随机分散在整个基因组里，不形成基因簇。[3]

在胚胎发生过程中，Sox2基因表现出多种不同的动态的表达模式, 这和它在各种发育事件中起着重要作用是一致的[4]。在整个成熟的卵母细胞中可以检测到高水平的 Sox2 蛋白的表达[5]，在2细胞期，Sox2 蛋白的表达转移到核内，从6~8细胞期一直到桑椹胚期，Sox2 蛋白的表达都主要在细胞核里，但细胞质里也有。而到了囊胚期时，在滋养外胚层细胞中，Sox2蛋白主要存在于细胞质中，而在内细胞团细胞中，Sox2 蛋白主要位于细胞核中，这说明母体 Sox2 蛋白的表达一直持续了整个着床前的发育阶段[6]。论文网

最早能在桑椹胚期的一些细胞里检测到Sox2基因的转录，之后Sox2基因在囊胚期的内细胞团中也有短暂的表达。卵圆柱期Sox2基因在外胚层和胚外外胚层表达。到了原条期即 6。5dpc，Sox2的表达遍布外胚层，而在紧接胚胎边缘的胚外外胚层呈带状分布[7]。在原肠胚形成早期，Sox2 基因在胚外的表达仅局限于绒毛膜，但是在胚胎里的表达却在前部外胚层，也就是将来产生神经外胚层的地方。在体外，Sox2还在未分化的胚胎干细胞(ES 细胞)、胚胎癌细胞(EC 细胞)中表达，并随着其分化表达下调[8]。

    我们通过构建Sox2CreER转基因小鼠，使其与另一只小鼠XXX-loxp（CKO，条件敲除）的交配，得到的f1代既有Sox2CreER，又在XXX基因上有loxp片段。然后给它注射一种雌激素，tomaxifen。这个激素诱导Cre重组酶入核，把loxp片段中间的就敲除了。这样空间上，只有表达了Sox2的细胞才能表达Cre，才能敲除。时间上，什么时候打这个激素，什么时间开始敲除。这样在时间和空间上都可以做到控制条件进行敲除。文献综述

目前Cre-LoxP重组酶系统在小鼠基因打靶中被广泛应用，相比传统的转基因技术，应用该系统的基因敲除具有时空特异性，优化了转基因小鼠模型。应用Cre-LoxP重组酶系统构建的转基因小鼠可在小鼠局部实现基因敲除，很大程度上避免小鼠过早死亡，为后续研究提供可行性。

二． 实验试剂与仪器

2。1 实验仪器

仪器 生产厂家

PCR仪 C1000 TOUCH Thermal Cycler