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云实内生菌Chaetomium globosumYSC5次生代谢产物研究(4)
1.2.4 菌株鉴定
形态学鉴定:参考魏景超(1979)《真菌鉴定手册》。采用光学
电子
显微镜观察菌株YSC5子囊和子囊孢的形态,获得光学图片。
分子学鉴定:采用DNA提取试剂盒N1191(广东东盛)提取内生菌DNA,利用通用引物ITS1(5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3')和ITS4(5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')(White TJ 1990)进行ITS1-5.8S-ITS2区域的扩增。25 μL PCR扩增反应体系为:模板DNA 1 μL,PCR Kit P2052(广东东盛)12.5μL,DNA聚合酶1 μL(2.5U μL-1),引物各1 μL,超纯水8.5μL。94 °C变性4 min后,反应程序为94 °C 30秒,60 °C退火30s,72 °C延伸1min,共35个循环,72 °C最终延伸10min。PCR产物用1%凝胶电泳进行检测回收后测序,所测序列利用BLAST 软件进行序列相似性分析[11]。
1.2.5 菌株YSC5次生代谢产物分离纯化及鉴定
综合利用硅胶柱层析、薄层层析、重结晶等各种技术对发酵产物进行分离纯化。
化合物结构鉴定通过波谱技术(MS, 1H,13C-NMR和2D-NMR)等方法并结合文献鉴定这些化合物的结构。
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