β-1，3-葡聚糖酶LamC的结晶条件筛选(3)
2.4重组酶LamC的诱导表达
将表达菌株Origami 2（DE3)-pET 32a-lamC划线活化，接种单菌落于含有100mg/mL氨苄霉素（Amp）的3mL液体LB培养基中，37°C，180rpm振荡过夜。取1mL菌液转接于100mL液体LB培养基（含100mg/mLAmp），37°C，180rpm培养至OD600为0.6左右，加入1M IPTG20μL，18°C，180rpm培养24h，8000rpm离心12分钟，弃去上清。沉淀用pH7.0 Tris-HCl将菌体吹悬，超声破碎后，12000rpm，4°C离心20分钟，收集上清。
2.5重组酶LamC的纯化
Ni 2+ -NTA 亲和层析柱预先以两倍柱体积的20 mMTris•HCl（pH 7.0）平衡，将含有重组酶LamC的破碎液离心上清上样至Ni 2+ -NTA亲和层析柱，4 ℃孵育 1 hr，以5倍柱体积含50 mM咪唑的20 mMTris•HCl（pH 7.0）洗去杂蛋白，然后以含100mM、200 mM、300 mM咪唑的20 mMTris•HCl（pH7.0，）缓冲液进行分步洗脱2倍柱体积，收集洗脱液，进行12% SDS-PAGE电泳进行纯度检测。
2.6重组酶LamC的SDS-PAGE检测