1.1.2试验处理    试验分四个处理:(1)对照(CK),正常营养液栽培;(2)对照+葡萄糖(CG);(3)盐胁迫(S);(4)盐胁迫+葡萄糖(SG)。其中(3)(4)处理向营养液添加NaCl(分析纯)达到75mmol∙L-1,并在下午5点向(2)和(4)处理的叶面喷施100 mmol∙L-1的葡萄糖,同时(1)和(3)处理喷施等量的去离子水,喷施时使叶片正反两面润湿,并无液体滴下。
    试验随机区组排列,每个处理12株,并重复3次,一共144株。在盐胁迫的第0、1、3、5、7天取样测量黄瓜幼苗叶片抗氧化酶活性和伤害指标,处理第7天测定生长指标和抗氧化代谢关键酶编码基因表达。
1.2 测定方法
1.2.1生长指标测定    试验处理7天后,随机从每个处理中取3株幼苗,清洗干净,然后用纸巾将植株上的水分吸干。用直尺测量幼苗株高(从茎基部到顶部生长点),用电子游标卡尺测量茎基部的茎粗(子叶节位置),利用Expression 1680叶面积扫描仪(Epson, Sydney, Australia)测定叶片的叶面积(从基部起第3片功能叶),并用图片分析软件进行分析(WinRHIZO, Regent Instruments. Inc., Quebec, Canada)。用电子秤称量样品的鲜重并记录。
1.2.2抗氧化酶活性分析    超氧化物歧化酶(SOD)活性测定采用氮蓝四唑光化还原法,在预冷的研钵中加入0.2g新鲜叶片,加入预冷的磷酸缓冲液(0.05mol∙L-1,pH=7.8),放在冰上研磨,离心(4℃,12000×g)20min,最后取上清液作为酶液。分别取预先配制的甲硫氨酸(Met)溶液、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液、磷酸缓冲液(PBS)、核黄素溶液、氮蓝四唑(NBT)溶液混合摇匀配制反应混合液。接下来分别将3mL反应混合液和30μL酶液加进同一试管中,将试管置于光照培养箱(4000 lux),光照下反应20min。同时准备两支对照管,其中一只试管取3mL反应混合液加入30μL PBS(不加酶液),照光后测定,作为最大光还原管,另一只对照管加缓冲液,放在暗处。以不照光的对照管调零,测560nm波长下的吸光值。
过氧化物酶(POD)活性测定使用愈创木酚法,粗酶液提取方法同SOD,取40μL提取液,然后加入3mL PBS(0.2mol∙L-1,pH=6.0)和愈创木酚的混合反应液,最后测定470nm下的吸光值(以PBS对照调零)。
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