外源葡萄糖对盐胁迫下黄瓜幼苗生长和抗氧化代谢的影响(3)
1.1.2试验处理 试验分四个处理：（1）对照（CK），正常营养液栽培；（2）对照+葡萄糖（CG）；（3）盐胁迫（S）；（4）盐胁迫+葡萄糖（SG）。其中（3）（4）处理向营养液添加NaCl（分析纯）达到75mmol∙L-1，并在下午5点向（2）和（4）处理的叶面喷施100 mmol∙L-1的葡萄糖，同时（1）和（3）处理喷施等量的去离子水，喷施时使叶片正反两面润湿，并无液体滴下。
试验随机区组排列，每个处理12株，并重复3次，一共144株。在盐胁迫的第0、1、3、5、7天取样测量黄瓜幼苗叶片抗氧化酶活性和伤害指标，处理第7天测定生长指标和抗氧化代谢关键酶编码基因表达。
1.2 测定方法
1.2.1生长指标测定 试验处理7天后，随机从每个处理中取3株幼苗，清洗干净，然后用纸巾将植株上的水分吸干。用直尺测量幼苗株高(从茎基部到顶部生长点)，用电子游标卡尺测量茎基部的茎粗（子叶节位置），利用Expression 1680叶面积扫描仪（Epson, Sydney, Australia）测定叶片的叶面积（从基部起第3片功能叶），并用图片分析软件进行分析（WinRHIZO, Regent Instruments. Inc., Quebec, Canada）。用电子秤称量样品的鲜重并记录。
1.2.2抗氧化酶活性分析 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定采用氮蓝四唑光化还原法，在预冷的研钵中加入0.2g新鲜叶片，加入预冷的磷酸缓冲液（0.05mol∙L-1，pH=7.8），放在冰上研磨，离心（4℃，12000×g）20min，最后取上清液作为酶液。分别取预先配制的甲硫氨酸（Met）溶液、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液、磷酸缓冲液（PBS）、核黄素溶液、氮蓝四唑（NBT）溶液混合摇匀配制反应混合液。接下来分别将3mL反应混合液和30μL酶液加进同一试管中，将试管置于光照培养箱（4000 lux），光照下反应20min。同时准备两支对照管，其中一只试管取3mL反应混合液加入30μL PBS（不加酶液），照光后测定，作为最大光还原管，另一只对照管加缓冲液，放在暗处。以不照光的对照管调零，测560nm波长下的吸光值。
过氧化物酶（POD）活性测定使用愈创木酚法，粗酶液提取方法同SOD，取40μL提取液，然后加入3mL PBS（0.2mol∙L-1，pH=6.0）和愈创木酚的混合反应液，最后测定470nm下的吸光值（以PBS对照调零）。