MSTN全称肌生成抑素(Myostatin),是1997年美国John Hopkins大学医学院的一个研究小组在研究转化生长因子β(TGF β)时发现的一种新的生长因子,被命名为生长/分化因子8(GDF8),该因子具有TGF β共有的结构特征。McPherron研究发现该基因缺失鼠肌肉增大,骨骼肌肌群分布更广泛,体重约是野生鼠2倍[8]。由于GDF8对骨骼肌的生长具有负调控作用,所以又命名为肌生成抑素[9]，该基因产物缺失会导致骨骼肌增生，研究证实其功能是抑制肌肉细胞的增值和分化。该基因一经发现就受到科学工作者的广泛重视,现已成为分子生物学领域的一个研究热点。MSTN基因在鱼类中的表达更广泛,该基因在鱼类的骨骼肌、眼、腮、肠、大脑、舌、眼、性腺等组织中均有表达,并且表达的时序性与肌形成一致[10,11,12]。

早期对鱼类的MSTN基因研究发现其不但调节肌细胞的增殖分化，还在早期的脊椎形成和神经系统发育中起重要作用。而有关华鳈MSTN基因的多态性相关研究尚未报道。所以本研究的洪泽湖的华鳈鱼苗为研究对象, 分别切取华鳈鱼苗的皮肤、肌肉、肾脏、精巢、脾脏、肠、心脏、中脑、下丘脑和垂体这10个部分的组织。采用 PCR和转化克隆技术获得华鳈MSTN基因序列，并通过在不同个体中的基因序列比对，分析该基因中存在的多态性位点，进而今后寻找多态位点与华鳈生长性状的关联性，进而为今后的华鳈中MSTN对生长性状的影响及其他功能研究提供本底资料。

2 材料与方法 

2。1 试验仪器

VORTEX-5 震荡器：海门市其林贝尔仪器制造有限公司；

Mini-7k 微型离心机：杭州奥盛仪器有限公司；

Gel DocTM EZ Imager 凝胶成像系统； 

DYY-6C型 电泳仪电源：北京市六一仪器厂；

UVG20 紫外分析仪：上海领成生物科技有限公司；

Eppendorf单道微量可调移液枪 ；

ND-2000C微量紫外分光光度计： Gene Company Limi 基因有限公司；

DK-S24电热恒温水浴锅：上海精宏实验设备有限公司 太仓精宏仪器设备有限公司；

SN210C灭菌锅；

HPS-160 生化培养箱 ；

DH6-914385-Ⅲ 电热恒温鼓风干燥箱：上海新苗医疗器械制造有限公司；

IMS-100 全自动雪花制冰机：常熟市雪科电器有限公司；

TGL-16GB 高速台式离心机：上海安亭科学科学仪器；

BSA124S 电子天平：塞多利科学仪器（北京）有限公司；

THZ-300C恒温培育摇床：上海一恒科技有限公司 上海一恒科学仪器有限公司。

2。2 试验样品 

在洪泽湖华鳈鱼苗样品中通过对其外观，病理检查等方法，检查选择体型体态体色正常的没有囊肿、充血、出血、溃疡、寄生虫或胞囊等病理变化的华鳈鱼苗，为后续实验做准备。

2。3 主要试剂

引物Hepcidin1，Hepcidin2自己设计，并由生工生物工程（上海）股份有限公司。

LB AMP+   有氨苄青霉素LB液体培养基

LB AMP-   无氨苄青霉素LB液体培养基

Gel Extraction Kit 快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒：购于康为世纪生物科技有限公司

AGAROSE G-10 琼脂糖论文网

HiFi-Script cDNA第一链合成试剂盒：购于北京康为世纪生物科技有限公司 

DH5α Competent Cell 大肠杆菌感受态细胞：购于康为世纪生物科技有限公司

pMD18-T vector 质粒：购于TaKaPa

2。4 华鳈MSTN基因cDNA序列扩增

2。4。1 RNA的提取 

取一条华鳈，麻醉，分别切取皮肤、肌肉、肾脏、精巢、脾脏、肠、心脏、中脑、下丘脑和垂体这10个部分各50 mg左右的组织，采用Trizol方法进行RNA的提取。在D2000分光光度仪上测定其浓度以检测RNA质量。检测合格的RNA（如表1）可立即用于cDNA的合成或放置−80 ℃冰箱保存待用。