鲫鱼皮肤维隆气单胞菌的分离鉴定与致病性评价(2)
2.1结果 3
2.1.1 菌落及形态特征 3
2.1.2 KP菌株的生理生化特性 4
2.1.3 药敏试验 4
2.1.4 人工感染实验结果 6
3讨论 7
结论 8
致谢 8
参考文献 8
引言：
鲫鱼（Carassius aumtus）属鲤形目、鲤科、鲫属，是一种主要以植物为食的杂食性鱼，具有肉质细嫩，肉甜美，营养价值很高等优点，而且鲫鱼分布广泛，全国各地水域常年均有生产，为我国重要食用鱼类之一［1］。
近年来，随着我国渔业养殖的迅速发展，鲫鱼养殖同样也成为越来越多养殖者致富手段；同时，鲫鱼疾病的多发成为阻碍渔业养殖发展的巨大阻碍，目前已从鲫鱼体内发现的致病菌有文隆气单胞菌（Aeromonas veronii）、温和气单胞菌（Aeromonas sobria）和嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）等［1］，对于鲫鱼有很高的致病性，相对与鲫鱼体内，鱼类皮肤与水体直接接触，而且水体中含有的致病菌种类繁多，导致鲫鱼皮肤患病的几率也很高，因此鲫鱼皮肤疾病的研究至关重要，对致病菌进行快速、准确地鉴定能对疾病的预防和治疗起到关键积极的作用。
文隆气单胞菌（A.veronii）属气单胞菌属（Aeromoans）［2］，广泛存在于淡水、污水、淤泥和土壤中［3］，由Hickman-Brenner等［4］首先分离并根据法国生物学家Véron的姓氏将其命名。唐毅等［5］人从患有烂尾病的华鲮（Sinilabeo rendahli）分离出文隆气单胞菌（A. veronii），并对其进行生理生化和药敏试验等研究。马志宏等［6］人从患病西伯利亚鲟（Acipenser baerii）体内分离出了文隆气单胞菌（A. veronii），并进行形态观察、生理生化、药敏试验和人工感染实验等研究。文隆气单胞菌（A. veronii）有一定致病性，Fiqueras［7］等人从饮用的自来水中分离到了文隆气单胞菌（A. veronii），表明该菌已经开始威胁人和水生物的健康。侯天文等［8］从换有慢性支气管炎和急性肺炎老年人的痰液中分离到了文隆气单胞菌（A. veronii）。在临床上文隆气单胞菌（A. veronii）主要从粪便中分离得到，也可从伤口和呼吸道分泌物中分离到，目前有关从鲫鱼皮肤中分离文隆气单胞菌的研究报道较少。
为研究患病鲫鱼皮肤中是否能分离出文隆气单胞菌（A. veronii）,本实验通过对患病鲫鱼皮肤细菌分离纯化获得一株细菌KP，并对其进行革兰氏染色观察、生理生化反应和药敏试验，初步确定为文隆气单胞菌（A.veronii）。为确定该菌的致病性，通过将菌液稀释后注射到健康鲫鱼的腹腔进行人工感染实验，感染的结果显示KP菌株对健康鲫鱼48h的致死率为75%，72h的致死率为100%，死亡鲫鱼出现局部鳞片脱落、皮肤出血、烂尾和溃疡等症状，验证了该菌对鲫鱼有很高的病性。该实验为鱼类皮肤细菌研究、鱼类疾病的预防提供一定的参考。
1材料与方法
1.1 实验动物
菌株分离自于徐州某市场售卖的鲫鱼，体重60g±5g，鲫鱼具有溃疡、皮肤出血、鳞片脱落、烂尾等症状。
1.2 实验主要试剂及仪器
主要试剂：生理生化鉴定管及标准药敏试纸等购自杭州生物科技有限公司。番红染色液、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养基、Solarbio（索莱宝）细菌基因组DNA提取试剂盒，克隆试剂试剂载体、酶 pMD18-T等购自上海生工公司。
主要仪器：移液枪、超净工作台、电子恒温箱、显微镜、恒温培养摇床摇床、琼脂糖凝胶电泳仪、PCR扩增仪等。