金银花有效成分的提取及其抗菌功效评价(3)
1.4 金银花中的抑菌成分
1.4.1 木犀草素
木犀草素（luteolin）是一种在多种植物中都有发现的天然黄酮类化合物。具有消炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒等功效，常用用于祛痰、消炎、止咳、治疗心血管疾病、治疗“肌萎缩性脊髓侧索硬化症”、SARS、肝炎等。
1.4.2 绿原酸
金银花的主要抗菌、抗病毒有效成分是绿原酸。绿原酸有多种领域中都有应用，在食品、保健、医药和日用化工等领域都有对其都有一定的研究。绿原酸通过抑制活化酶来抑制致癌物黄曲霉毒素B1和苯并[a]-芘的变异原性，因此具有抑制突变和防止肿瘤生长作用，。绿原酸抗癌、防癌的原理是可通过降低致癌物的利用率及其在肝脏中的运输。
金银花提取物中绿原酸含量的高低会直接影响提取物的疗效[13-14]，故研究绿原酸的提取方法的有十分重要的意义。目前绿原酸的提取方法主要有：水提法[15]、水提醇沉法[16]、醇提法[17-18]、超声波提取法[19]、微波提取法[20]、石硫法[21]、酶解法[22]和高速逆流色谱提取法[23]。其中石硫法指的是金银花水提液加入熟石灰将pH值调节至11-12，静置之后提取沉淀，再加入硫酸溶液将pH值调节至6-7，取滤液浓缩至稠膏状，得到绿原酸粗品。酶解法指的是将金银花用纤文素酶处理后，金银花细胞壁中的纤文素被水解成水溶性的糖类物质，细胞壁水解破裂，使得金银花中的绿原酸溶出。上述方法中，对绿原酸的提取效率较高的是超声波提取法、酶解法、高速逆流色谱提取法、微波提取法，但由于目前技术或设备限制，还无法应用于工业化生产。在工业上常用于提取绿原酸应用较多的方法是水提法、水提醇沉法、醇提法，但是这几种方法有着共同的缺陷就是绿原酸的提取效率一般，而且提取物中所含的鞣质过多，不是绿原酸提取的最佳方法。石硫法也是工业上提取绿原酸常用的方法之一，该方法在提取液中加入了适当的石灰乳，可以令鞣质与钙离子生成沉淀而被除去，但有效成分绿原酸的损失也很大。目前，工业上提取绿原酸的常用方法是改良石硫法[24-25]。改良石硫法是指金银花水提液加入熟石灰将溶液pH值调节至11-12，使水提液中的绿原酸形成难溶于水的钙盐，静置后取钙盐沉淀。将沉淀溶于乙醇溶液中，再加入硫酸溶液将溶液pH值调节3-4，使绿原酸钙盐分解，绿原酸作为游离酸溶于乙醇溶液中。过滤后，再在乙醇溶液中加入氢氧化钠溶液将溶液pH值6.5-7.0后过滤，将滤液浓缩至稠膏状，得到绿原酸粗品。改良石硫法可有效的将水提液中的鞣质被除去，而绿原酸得以保留。
1.5 抑菌效果评价方法
1.5.1 抑菌圈法
抑菌圈法，又称水平扩散法，具有精确度高、操作简单的有点。其基本原理是在已接种供试菌的固体培养基上施加抗菌剂，经过定温定时培养后，药剂逐步扩散，施药部位周围因杀死了供试菌从而抑制了病菌在培养基上的生长，产生了抑菌圈。在一定范围内，抑菌圈直径或面积与药剂浓度的对数呈线性函数关系，因而可以比较抑菌剂的抗菌效果。
1.5.2 琼脂稀释法
琼脂稀释法的操作方法：将定量MH琼脂融化并冷却至50℃左右，然后将不同浓度的抗菌剂，制成含不同递减浓度抗菌剂的平板，接种供试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低抗菌剂浓度为其最小抑菌浓度。本法优点是可在一个平板上同时作多株菌最小抑菌浓度的测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1.5.3 最小抑菌浓度法
在液体培养基内加入一定浓度的植物提取物，再加入单菌落，培养24小时，观察其不同浓度的浑浊程度。