Microbulbifersp.A4B-17菌株的对羟基苯甲酸合成研究(2)
3 讨论 14
致谢 14
参考文献 15
引言
微生物Microbulbifer，又叫微泡菌，属于变形菌纲，在海洋环境中广泛存在。由于其在合适的碳源条件下，能够产生次级代谢物对羟基苯基酸以及酯类，所以受到越来越多人的关注。4HBA可以用作很多方面，因为他是有机合成原料的一种，当然这其中还包括4HBA丁酯等，它们可以作为食品添加剂放入食品中，4HBA还广泛用于其他方面如食品、化妆品、医药的防腐、防霉剂和杀菌剂等。当然其也在芳香族化合物的合成与降解中扮演者重要中间代谢产物的角色，在食品和化妆品的保存上也被广泛应用。
对于4HBA来讲，我们可以用很多方法将其制备，例如苯酚钾羧化法，利用微生物合成法等。前者使用于工业生产，因为前者生产方便，经济效益比较高。该生产方法大致是将氢氧化钾与苯酚混合，然后经过一系列的化学反应得到羧化液，最后在加入硫酸经过冷却过滤，活性炭脱色，即可得到纯度较高的4HBA。然而该方法也有很大的缺点，就是当进行到第二环节时会造成生产成本浪费，效率也比较低。其次该工业生产法并不能做到高效、清洁生产，对环境会造成很大的污染。进入21世纪以后，不可再生资源越来越少以及随着全球工业化程度越来越高，加剧了对环境污染使得温室效应不断加剧。因此，对于可再生资源以及生物方法的开发利用不可或缺并且已成为全球当务之急。
A4B-17菌株在MB培养基中的生长速度很快，几个小时后就能够达到稳定期。有一些海洋微生物如果放在实验室里培养其浓度并不能达到很高，而A4B-17菌株在实验室里很容易培养，短时间内其浓度会达到很高，方便了今后将其开发成工业微生物。但由于MB培养基成分不确定，为了证明A4B-17菌株能够在含有碳源的培养基以及MB培养基中产生次级代谢物4HBA以及酯类，方便高效生产。因此在本实验中首先分析A4B-17菌株的代谢途径，其次将丙酮酸钠、木糖、海藻酸钠、半乳糖、葡萄糖、D-果糖、阿拉伯糖、蔗糖、甘露醇、甘油这10中物质作为唯一的碳源加入到海水培养基中，再将A4B-17菌株放入海水培养基中对其进行培养，证明A4B-17菌株能否有效利用碳源，并探明A4B-17究竟能利用哪些碳源以及利用哪种碳源效率最高；其次用试剂配制成不同浓度的4HBA以及4HBA丁酯样品，利用高效液相色谱分析绘制出对羟基苯甲酸及其酯类的标准曲线。最后将A4B-17菌株放在营养程度不同的三种培养基中进行培养，然后离心提取上清液进行高效液相色谱分析，将其与标准曲线进行对照，发现其中都含有对羟基苯甲酸。这样就方便了以后能够高效的利用它生产目的产物4HBA及其酯类，更方便了以后的实验研究。