图3-2 ZFAND5基因的溶解曲线 8

图3-3 ACTIN基因扩增图 9

图3-4 ZFAND5基因扩增图 9

图3-5 徐淮山羊胎羊组织中ZFAND5基因的相对表达水平 10

表清单

表序号 表名称 页码

表2-1 主要实验仪器设备 3

表2-2 荧光定量PCR反应体系 5

表3-1 RNA浓度纯度表 6

表3-2 组织中ZFAND5基因的表达量 7

表3-3 徐淮山羊胎羊组织中ZFAND5基因的相对表达量 10

1绪论

在生物体内，几乎所有的生命活动都会涉及到生物大分子之间的相互作用，而这些作用则需要依赖于大分子内部的某些特殊结构域。在以往的认知中，组成这些结构域的多肽片段则不少于50个氨基酸残基的长度，但近年来则发现了一些特殊的结构域，它们是由较短的多肽片段所组成，也就是说其长度是小于50个氨基酸残基的长度。正是因为这些多肽片段的长度较短，所以它们则不能通过自身的折叠来形成较为稳固的结构，这时候就需要借助其他的工具了，比如说锌离子。在一定条件下，锌离子可以不通过任何的化学反应就能够与上述的结构稳定地结合在一起。因此，那些由较短的多肽片段所构成的结构域就完全可以通过结合锌离子来维持其结构的稳定性，从而发挥出特殊的功能[1]。由此则形成了一种特殊的结构单元——锌指结构，简称锌指（zinc finger）。

锌指（zinc finger）是指在DNA结合蛋白中经常出现的一种结构单元，是锌螯合在氨基酸链中形成的相对独立的“指”状四面体结构，由多个半胱氨酸和（或）组氨酸构成。锌指能够与DNA、RNA以及DNA-RNA杂交双链分子结合的同时，还可以与其他锌指蛋白或其自身相结合，并可以在转录和翻译的过程中来调控基因的表达[2]。

锌指结构最早是在非洲爪蟾卵母细胞的转录因子TFⅢA中发现的，之后人们又陆续在不同生物中发现了此类结构，而且将含有这种结构的蛋白质，统称为锌指蛋白（Zinc finger protein），其存在于各类真核生物中，与生物体的一系列重要生命活动（如细胞的增殖、分化和凋亡等[3]）有密切的联系。锌指蛋白中最重要的部分就是锌离子，它在锌指蛋白的调控功能中起到关键性作用[2]，通过锌指结构，锌离子可以促使激活子蛋白与增强子序列两者特异性地结合在一起，从而调节基因的表达。锌指结构是通过锌提供的链间交叉连接来维持其稳定性的，所以当锌离子缺乏时，锌指则不能形成折叠结构。倘若将锌指蛋白中的锌离子除去，或者用其他金属离子来置换，那么锌指蛋白的生理活性就会丧失，较难与DNA等物质相结合，同时其自身的稳定性也会遭到破坏，从而最终影响到基因的表达，即使是用半胱氨酸或组氨酸来代替锌离子，锌指蛋白的功能通常也会丧失。因此，想要锌指蛋白能够有效的发挥功能，就需要保证其内部锌指结构的稳定性。

锌指蛋白可以分成许多个亚型家族，其中包括Cys2His2(TFⅢA锌指)、Cys2HisCys(逆转录病毒粒子)、Cys8(类固醇-甲状腺素受体)、Cys4(GATA-1锌指)、Cys3HisCys4(环状锌指)、Cys4HisCys3(requium锌指)、Cys3His(Nup475锌指)、Cys6(GAL4锌指)和Cys2HisCys5(LIM锌指)等。Cys2His2型锌指蛋白构成最大的转录因子家族[4]，也是目前研究最多的锌指结构，而且该类型的锌指蛋白在真核生物的转录因子中含量最丰富。