摘要本实验使用的材料为大花金桂（Osmanthus fragrans‘Dahuajingui’）子叶切块诱导的愈伤组织。选择生长旺盛、致密的桂花愈伤组织块与含有SsGAI基因的根癌农杆菌进行共培养，通过卡那霉素（Kanamycin）抗性筛选，以获得部分转基因愈伤组织，最终能够得到矮化的大花金桂。本实验主要探究的是侵染时间对农杆菌转化桂花效率的影响，通过对实验数据的记录可以初步确定当侵染时间为10min时，农杆菌的转化率最高。同时，实验对损伤处理和超声波处理对愈伤转化率的影响进行了探究，表明对愈伤组织进行两种处理得到的转化率最高。44081

Abstract

The experimental materials used for large flower Kim (Osmanthus fragrans' Dahuajingui ') callus induced from cotyledon cuts, and Selection of vigorous growth, compact callus and sweet scented osmanthus block containing the SsGAI gene of Agrobacterium Co cultivation,.The transgenic callus was screened using kanamycin. In order to obtain the transgenic callus, eventually to be dwarfed Osmanthus fragrans ‘Dahuajingui’. The experiment showed the impact of infect time with agrobacterium-mediated transformation, in order to get the best time of infect.

毕业论文关键词：大花金桂； SsGAI基因； 转基因； 根癌农杆菌

Keyword: Osmanthus fragrans‘Dahuajingui’; SsGAI Gene; transgenosis; Agrobacterium

目    录

1材料与方法 3

1.1.材料 3

1.2农杆菌的培养、活化及侵染液的制备 3

1.3预培养 4

1.4农杆菌侵染 4

1.5共培养 4

1.6延迟筛选 5

1.7筛选 5

2结果与分析 5

2.1侵染时间对农杆菌转化率的影响 5

2.2外植体处理对转化的影响 6

2.3愈伤组织褐变情况分析 7

3讨论 8

引言

桂花(Osmanthus fragrans Lour.)属于木犀科木犀属的代表物种，也是我国十大名花之一，集绿化、美化、香化于一身，属于观赏和实用兼备的优良园林、经济树种，深受我国人民的喜爱[1]。虽然桂花具有许多优点，但也存在许多问题，如桂花单朵期很短，只有8、9天对其美化、香化功能也有影响；另外，桂花的叶色单一，还无彩叶的桂花品种；桂花的抗寒能力弱，长江以北难以栽培[2]。如何培育出花期长、彩叶、抗寒能力强的桂花新品种是今后桂花育种中的长期课题。但是桂花属于木本植物，它的童期较长，如果采用常规的杂交育种方法进行新品种的培育，很难获得所期望获得的品种，所以，就需利用现代生物技术来培育桂花新品种。

赤霉素（GA）是调节植物生长的五大激素之一激素，他能够作用于高等植物的整个生命周期，影响种子的萌发、茎的伸长、花的诱导和种子的形成[3]。而且植物对各种环境因子的应答作用是通过调节内源性赤霉素的生物合成量来调节的。因此，在植物生长发育及植物体对生长环境的适应能力中赤霉素的生物合成起着非常重要的作用。

在过去的研究中, GAs 的生物合成方式及其代谢途径已经被研究清楚了；并成功克隆了这些途径中的基因。最近几年，科学家开始研究内源植物激素如何调控植物的生长及发育, 即探讨植物激素分子(信号) 引起植物发育过程(信号转导途径)的分子机理。研究表明，当植物细胞接收胞外的信号后，通过跨膜的受体传到体内，经过一系列的中介，产生一系列的生化反应，并导致植株产生正常的生理现象[4]。