车前草多糖提取工艺研究(2)
仪器：AL204电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）、HWS 24型电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）、格兰仕WD 800型微波炉（顺德市格兰仕微波炉电器有限公司）、SHB-III循环水式真空泵（郑州欧卡仪器设备有限公司）、HC-3018高速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）、电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）、UV-5100型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。
1.2车前草多糖的提取及含量测定[10]
1.2.1多糖含量测定原理
多糖含量采用苯酚—浓硫酸法测定。糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量。
1.2.2标准曲线的绘制
准确称取干燥至恒重的葡萄糖标准品0.25 g，加蒸馏水溶解并稀释，于1000 mL容量瓶中定容至刻度。准确移取标准溶液0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80 mL浓度为250 μg/mL的葡萄糖溶液，分置于试管中，各加蒸馏水补足至每管1 mL，再各加入6%的苯酚溶液1 mL，摇匀，依次加入98%的浓硫酸5 mL，摇匀，静止15 min后，置于40℃的条件下30 min，冷却后在490 nm波长下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，以葡萄糖含量为横坐标制作标准曲线。
1.2.3车前草多糖提取率的测定
从车前草多糖的粗提取液中各取出1 mL，置于10 mL的试管中，各加入6%的苯酚溶液1 mL，摇匀，依次加入98%的浓硫酸5 mL，摇匀，静止15 min后，置于40℃的条件下30 min，冷却，于波长490 nm处测定吸光度。根据回归方程算出测量多糖的C0（μg/mL）。
按照以下公式计算提取物多糖的提取率（mg/g）。
提取率（mg/g）=C0VK×10-3/W ；式中：C0-测量液多糖的浓度（µg/mL）；V-粗提取液体积（mL）；K-为稀释倍数；W-原料干重（g）。
1.2.4车前草多糖提取工艺流程[11]
粉碎的车前草10 g→蒸馏水水浴浸泡2 h，微波提取两次→抽滤→合并提取液→按照5:1的比例在合并液中加入氯仿：正丁醇（5:1）混合液后充分摇匀→离心（4000 r/min，10 min），取上清（目的是除去蛋白质）→烘箱浓缩→按照浓缩液与乙醇比为1:3的比例加入无水乙醇沉淀多糖→搅拌均匀、静置过夜→离心（4000 r/min，15 min），取沉淀→用乙醚洗涤沉淀、离心→烘干→定容至50 mL测多糖含量。
2.结果与分析
2.1苯酚-硫酸法葡萄糖标准曲线
苯酚-浓硫酸法葡萄糖标准曲线如图1，回归方程为y=0.0073x-0.0188。
图1 苯酚-浓硫酸葡萄糖标准曲线
2.2料液比对车前草多糖提取率的影响
准确称量10 g粉碎的车前草5份，分别设置料液比1:10、1:15、1:20、1:25、1:30的条件下80℃水浴浸泡2 h，微波功率为中火，微波时间为3 min，研究料液比对车前草多糖提取率的影响。
图2 料液比对车前草多糖提取率的影响
由图2可知，在一定的范围内，车前草多糖提取率随着料液比的增加而增加，当料液比达到1:25时多糖得率达到最大，此时多糖提取率为127.43 mg/g，当料液比继续增加为1:30时，多糖提取率反而下降。由于料液比太大会影响后续的浓缩等操作，综合考虑，料液比1:25为最佳。
2.3微波功率对车前草多糖提取率的影响
在料液比为1:25、80℃水浴浸泡2 h、微波处理时间3 min的条件下，研究不同微波功率低火、解冻、中火、中高火、高火对车前草多糖提取率的影响。
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