仪器:AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)、HWS 24型电热恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)、格兰仕WD 800型微波炉(顺德市格兰仕微波炉电器有限公司)、SHB-III循环水式真空泵(郑州欧卡仪器设备有限公司)、HC-3018高速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)、电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)、UV-5100型紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)。
1.2车前草多糖的提取及含量测定[10]
1.2.1多糖含量测定原理
多糖含量采用苯酚—浓硫酸法测定。糖在浓硫酸作用下,水解生成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合成橙黄色化合物,且颜色稳定,在波长490 nm处和一定的浓度范围内,其吸光度与多糖含量呈线性关系正比,从而可以利用分光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量。
1.2.2标准曲线的绘制
准确称取干燥至恒重的葡萄糖标准品0.25 g,加蒸馏水溶解并稀释,于1000 mL容量瓶中定容至刻度。准确移取标准溶液0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80 mL浓度为250 μg/mL的葡萄糖溶液,分置于试管中,各加蒸馏水补足至每管1 mL,再各加入6%的苯酚溶液1 mL,摇匀,依次加入98%的浓硫酸5 mL,摇匀,静止15 min后,置于40℃的条件下30 min,冷却后在490 nm波长下测定吸光度,以吸光度为纵坐标,以葡萄糖含量为横坐标制作标准曲线。
1.2.3车前草多糖提取率的测定
从车前草多糖的粗提取液中各取出1 mL,置于10 mL的试管中,各加入6%的苯酚溶液1 mL,摇匀,依次加入98%的浓硫酸5 mL,摇匀,静止15 min后,置于40℃的条件下30 min,冷却,于波长490 nm处测定吸光度。根据回归方程算出测量多糖的C0(μg/mL)。
按照以下公式计算提取物多糖的提取率(mg/g)。
提取率(mg/g)=C0VK×10-3/W ;式中:C0-测量液多糖的浓度(µg/mL);V-粗提取液体积(mL);K-为稀释倍数;W-原料干重(g)。
1.2.4车前草多糖提取工艺流程[11]
粉碎的车前草10 g→蒸馏水水浴浸泡2 h,微波提取两次→抽滤→合并提取液→按照5:1的比例在合并液中加入氯仿:正丁醇(5:1)混合液后充分摇匀→离心(4000 r/min,10 min),取上清(目的是除去蛋白质)→烘箱浓缩→按照浓缩液与乙醇比为1:3的比例加入无水乙醇沉淀多糖→搅拌均匀、静置过夜→离心(4000 r/min,15 min),取沉淀→用乙醚洗涤沉淀、离心→烘干→定容至50 mL测多糖含量。
2.结果与分析
2.1苯酚-硫酸法葡萄糖标准曲线
苯酚-浓硫酸法葡萄糖标准曲线如图1,回归方程为y=0.0073x-0.0188。
 
图1 苯酚-浓硫酸葡萄糖标准曲线
2.2料液比对车前草多糖提取率的影响
准确称量10 g粉碎的车前草5份,分别设置料液比1:10、1:15、1:20、1:25、1:30的条件下80℃水浴浸泡2 h,微波功率为中火,微波时间为3 min,研究料液比对车前草多糖提取率的影响。
 
图2 料液比对车前草多糖提取率的影响
由图2可知,在一定的范围内,车前草多糖提取率随着料液比的增加而增加,当料液比达到1:25时多糖得率达到最大,此时多糖提取率为127.43 mg/g,当料液比继续增加为1:30时,多糖提取率反而下降。由于料液比太大会影响后续的浓缩等操作,综合考虑,料液比1:25为最佳。
2.3微波功率对车前草多糖提取率的影响
  在料液比为1:25、80℃水浴浸泡2 h、微波处理时间3 min的条件下,研究不同微波功率低火、解冻、中火、中高火、高火对车前草多糖提取率的影响。
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