水稻不育突变体f287的图位克隆及功能预测(3)
1．1．1 实验材料
本研究以从宁粳4号的EMS诱变群体中筛选得到不育突变体f287为研究材料。f287/宁粳4号的杂交后代用作突变基因的遗传分析。构建定位群体时，以突变体f287为母本，籼稻品种dular为父本配组，选取F2群体中的169个隐性极端单株进行研究。所有材料均种植于江苏省农科院。
1．1．2 主要实验试剂及其配置
凝胶电泳工作液配方：
(1) 0.5 M EDTA (pH 8.0 )配方：
Na2EDTA•2H2O 186.1 g
10 mol/L NaOH 调至pH 8.0 (约50 mL)，
总体积 1 L
(2) 10×TBE配方:
Tris 108 g
硼酸 55 g
0.5 M EDTA (pH8.0) 40 mL
总体积 1 L
电泳缓冲液为0.5×TBE，需要进行1:19稀释后方可使用
(3) 40% PAGE配方:
丙烯酰胺 380 g
Bis-丙烯酰胺 20 g
总体积 1 L
4℃保存
(4) 10% APs配方:
过硫酸铵溶 30 g
总体积 300 mL
APs现用现配
(5) 指示剂配方:
溴酚蓝 0.25 g
二甲苯氰 0.25 g
蔗糖 40 g
总体积 100 mL
8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶的配方如下
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