紫薯ANR基因序列多样性分析(2)
1.2 方法1.2.1 基因组 DNA 的提取采用CTAB 法提取叶片总 DNA[9]:1.取出材料置于冰上，用液氮研磨成细粉末再放置于 50ml 离心管中2.加入 65℃预设的2×CTAB(5ml/g 材料)，并放于 65℃水浴中45min 以上，间或搅拌3.离心(13000×25min，室温，用三氯甲烷：异戊醇=24:1平衡)4.将上清倒入干净的 10ml 离心管，加入等体积的三氯甲烷：异戊醇(24:1)混匀，轻摇30min 以上，再次离心(13000×25min，室温)5.吸出上清液，重复第四步6.将上清液吸到 10ml 离心管，加入 2/5体积在-20℃预冷过的异丙醇，接着用钢针缓慢搅动致使DNA 沉淀，再将此 DNA移到 1.5ml 干净离心管中7.用 10mMNaAc 和 75％乙醇洗涤2-3次8.离心(10000×5min)9.将 95％乙醇加入上述离心管中，再离心(10000×5min)，然后清洗10.将离心管中的乙醇倒去，真空抽干，将离心管中物质荣誉 20ulRNase 且ph=8.0的 TE中，在 37℃的环境下消化RNA1h。11.将提取出来的 DNA 放入-20℃的冰箱中备用12.从冰箱中取出相应 DNA，每种提取 0.5ul稀释到100ul 体积，用NanoDrop2000测定其浓度