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亚精胺对淹水胁迫下玉米幼苗根系抗氧化代谢调控(4)
1.6.2 酶活力的测定
取3个50mL洁净干燥的三角瓶,标上瓶号,并按下表准确地加入各项试剂:
瓶号 蒸馏水 抗坏血酸 偏磷酸
将三角瓶放在水浴上加温至18℃~25℃,然后每隔2min在瓶中依次加入酶液2mL,将各瓶在18℃~25℃水浴中保温30min后,立即按原顺序向①、②号瓶中加入偏磷酸1mL(以终止酶的活力)。待反应瓶冷却后,各加淀粉溶液3滴(作指示剂),用微量滴定管以0.83mol/L的碘液进行滴定,直至各瓶出现浅蓝色为止,记录滴定值。
用每克叶组织每分钟氧化抗坏血酸的毫克数来表示抗坏血酸氧化酶的活力。计算公式如下:
抗坏血酸氧化酶的活力[mg/(g.min)]={[③-(①+②)/2]×0.44(B/A)}/(W×t)
式中圆圈内的数字为各号瓶中用0.83mol/L碘液滴定时耗用的碘液毫升数;
0.44为每毫升0.83mol/L碘液氧化抗坏血酸的毫克数;
B为酶提取液总体积(mL)
A为测定时酶液的用量(mL)
W为样品的鲜重(g)
T为酶促反应时间(min)
1.7超氧阴离子O2-产生速率的测定
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