摘  要：丝状真菌里氏木霉是多细胞真核生物，其作为工业菌株用于生产分解不同植物材料的酶类如纤维素酶，但里氏木霉仍然存在产纤维素酶活力较低的不足。本论文以里氏木霉Rut C-30为产酶菌种，在种子培养时期，改变种子培养基的C源、N源、种子培养时间、培养温度以及接种量后，进行一定时间的发酵培养，选出最优的种子培养条件。实验结果显示种子培养基添加0.1％的微晶纤维素，酶活提高8.3％；添加0.15％的酵母膏，酶活提高38.9％。在32℃下培养，酶活提高33.3％。培养16h，酶活提高38.9％。接种到发酵培养基里的量为8.75％时，酶活提高50％。59240

毕业论文关键词：里氏木霉，纤维素酶，种子培养，酶活

Abstract: The filamentous fungi Trichoderma reesei is multicellular eukaryotes. As industrial cellulase producing strain, it produces complex enzymes that break down different plant materials. But the cellulase production expense by T. reesei is still too high. Using T. reesei as cellulase production strain, this thesis studies the effect of different inoculum on the cellulase production, therefore finding the best culture condition for T. reesei inoculum. The results shows that the cellulase activity increases about 8.3% when adding 0.1％ avicel to the controlled inoculum culture medium; the cellulase activity increases about 38.9% when adding 0.15％ yeast extract to the controlled inoculum culture medium; the cellulase activity increases about 33.3% when the inculum was cultured at 32℃; the cellulase activity increases about 50% when the inculum volume increased to 8.75%.  

Keywords：Trichoderma reesei, cellulose, inoculum, cellulase activity

目   录

1 绪论 6

1.1 研究背景 6

1.2 里氏木霉 6

2 材料与方法 6

2.1 菌种 6

2.2 培养基 6

2.3 变量设置与培养基数量 7

2.3.1 种子培养基 7

2.3.2 发酵培养基 7

2.4 检测方法 8

2.4.1 纤维素酶滤纸活性的测定 8

2.4.2 实验过程 8

2.4.3 注意事项 9

3 实验结果处理与分析 10

3.1 结果处理 10

3.1.1 微晶纤维素对酶活的影响 10

3.1.2 秸秆对酶活的影响 10

3.1.3 微晶纤维素与秸秆的比较 11

3.1.4 酵母膏对酶活的影响 12

3.1.5 蛋白胨对酶活的影响 12

3.1.6 酵母膏与蛋白胨对酶活影响的比较 13

3.1.7 不同接种量对酶活的影响 14

3.1.8 培养时间对酶活的影响 14

3.1.9 温度对酶活的影响 15

3.2 分析与讨论 16

结  论 17

参考文献： 18

致谢 19

 1 绪论

1.1 研究背景

纤维素酶是指能水解纤维素β-1,4葡萄糖苷键，使纤维素变成纤维二糖和葡萄糖的一组酶的总称，它不是单一酶，而是起协同作用的多组分酶系[1]。伴随着不可再生的化石能源的消耗，传统能源将会逐渐枯竭，人类也将面临能源枯竭带来的生存危机。为了经济的可持续发展和人类的生存，我们必须寻求新兴能源来代替不可再生性能源。木质纤维素是地球上最丰富的可再生资源，其年产量高达1000亿吨，这些能量相当于全球人类每年能源消耗量的20倍，食物所含能量的200倍，是可以永续提供的生物资源[2]。但在自然界中有机固体废弃物一半以上的成分是纤维素和半纤维素[1]，造成了极大的浪费。高昂的纤维素酶价格是制约木质纤维素转化酒精工业化的原因之一，使用廉价的木质纤维素原料为碳源是降低纤维素酶成本的有效方法[3]。在自然界中有很多产纤维素酶的微生物，主要是一些霉菌和细菌，它们在自然界碳素循环中扮演着重要角色。有的已经成为生产纤维素酶的重要工程菌。目前广泛用于生产纤维素酶的菌种主要有曲霉属、青霉属、木霉属的菌种，应用最广的纤维素酶生产菌是里氏木霉的优良突变株[4]。