1.1.3 分子生物学试剂 6

1.1.4 载体质粒通过电击法转入农杆菌培养 6

1.1.5 含有阳性克隆的农杆菌的鉴定 6

1.1.6 含CymMV侵染性克隆质粒的农杆菌的培育 7

1.1.7含有侵染性克隆农杆菌的注射接种 7

1.1.8 病毒侵染的本氏烟叶片总RNA的提取 7

1.1.9病毒侵染的本氏烟叶片中病毒的RT-PCR检测 8

1.2 实验结果 8

1.2.1建兰花叶病毒侵染性克隆在本氏烟上的症状 8

1.2.2病毒侵染的本氏烟叶片中病毒的RT-PCR检测结果 9

1.3讨论 10

2.齿兰环斑病毒ORSV侵染性克隆毒性检测 10

引言 10

2.1材料与方法 10

2.1.1 植物材料 10

2.1.2 质粒材料 10

2.1.3 分子生物学试剂 11

2.1.4 载体质粒通过电击法转入农杆菌培养 11

2.1.5 含有阳性克隆的农杆菌的鉴定 11

2.1.6 含ORSV侵染性克隆质粒的农杆菌的培育 11

2.1.7 含有侵染性克隆农杆菌的注射接种 11

2.1.8 病毒侵染的本氏烟叶片总RNA的提取 12

2.1.9 病毒侵染的本氏烟叶片中病毒的RT-PCR检测 12

2.2 实验结果 12

2.2.1 齿兰环斑病毒ORSV侵染性克隆在本氏烟上的症状 12

2.2.2 齿兰环斑病毒ORSV侵染性克隆在本氏烟上RT-PCR检测 12

2.3讨论 13

参考文献 14

致谢 15

 引言

蝴蝶兰（Phalaenopsis hybrid）花朵色彩艳丽，形似翩飞的蝴蝶，姿态高贵典雅，深受花迷们的青睐，观赏价值极高，被称为“洋兰皇后”。蝴蝶兰的盛花季节正值中国传统春节，摆放可烘托节日喜庆、繁荣、富足的气氛，因而受到市场的欢迎与追捧，市场需求日益高涨，体现出蝴蝶兰极高的经济价值。

兰科植物在实际的种植和培育中，非常容易受到病毒感染。兰花病毒病常造成兰花叶片卷曲、褪绿，形成枯斑、坏死斑，植株矮化，生长畸形以及花朵变色等症状，甚至导致植株死亡，严重影响兰花的观赏价值及经济价值，阻碍兰花产业的发展。

兰花病毒可以说是无处不在。它不但能感染人工培育的兰花品种，也能侵染生长在自然条件下的野生兰花。在兰科植物病害中，病毒病可以说是影响兰花生长的头号杀手。兰花一旦受到病毒感染，无论是它的观赏还是栽培价值、药用价值都会极具下降。有关兰花病毒最早的记录是在1943年，澳大利亚人Magee在建兰上发现了一种“黑病”，经证实是建兰花叶病毒。兰花病毒至今尚未有彻底根治的药剂，所以被称为兰花癌症。

建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus, CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus, ORSV)是兰科植物中最为普遍的两种病毒，发病广泛并且危害较大[1,2,3]。