容易感染CymMV病毒的兰花品种有墨兰、文心兰、大花蕙兰、报岁兰、嘉得利亚兰、虎头兰、万代兰、糊蝶兰等等[4]。CymMV属于马铃薯X病毒组[5]，ORSV属于烟草花叶病毒组[5]，能通过汁液、蚜虫和机械等方式侵染兰科及其他科共20多种植物现。有研究通过摩擦接种的方法在本氏烟叶片上接种CymMV和ORSV病毒，植株表现出明显的病症[6] 。

病毒的扩繁、提纯和保持活性对于病毒基因组的功能以及致病性研究是重要的基础环节，但是野生型病毒的复制能力不能保持稳定，在自然环境下还因易发生同源重组而产生变异。而构建病毒的侵染性克隆就可以有效解决上述问题。源:自'优尔.·论,文;网·www.youerw.com/

病毒的侵染性克隆，是指人工获得的具有侵染活性的病毒体外转录RNA或者是具有转录活性的病毒cDNA[7]或DNA，一般都可以通过细菌质粒来进行大量复制，并可通过现代分子生物技术进行基因的突变、插入，实现表达基因的编辑[8]。病毒侵染性克隆是研究病毒功能及植物互做的基本技术平台，该技术的广泛应用推动了病毒学，病理学，遗传学的研究。

现常用的的侵染性克隆构建有两种方法，一种是将病毒基因组克隆到质粒载体上，在序列前端添加T7、SP6、T3等原核表达的启动子[9]，然后通过体外转录的方法获得大量的病毒全长RNA，再通过摩擦接种寄主植物，从而实现RNA病毒的侵染[10]；1982年在TGMV上通过磨擦接种的方法构建成功了第一个侵染性克隆。之后这种方法在多种RNA病毒上获得了成功，如PVX，TRV，TMV病毒[11,12,13]。

第二种侵染性克隆构建的策略是在植物双元表达载体上通过花椰菜花叶病毒（Cauliflower mosaic virus，CaMV）的35S启动子来转录外源基因[14,15]，再通过农杆菌浸润接种植物来实现病毒的侵染,这种方法具有操作过程简单快捷，侵染效率高，重复性好的特点。

侵染性克隆可以用来分析植物病害的病原物种类和分布，鉴定我们克隆得到的病毒基因组是否为田间产生病害的相同病原物, 利用侵染性克隆还可以测试该病毒病原物的寄主范围。由于侵染性克隆源于原核质粒载体，通过现代分子操作手段可以对其进行基因的插入突变、置换突变、基因敲除等操作，通过构建一系列稳定表达的病毒突变体和重组体的侵染性克隆，可以明确相关致病基因的功能及致病因子的关键功能域或关键氨基酸位点[16]。

1.建兰花叶病毒CymMV侵染性克隆毒性检测

引言

病毒的扩繁、提纯和保持活性对于病毒基因组的功能以及致病性研究是重要的基础环节，但是野生型病毒的复制能力不能保持稳定，在自然环境下还因易发生同源重组而产生变异。而构建病毒的侵染性克隆就可以有效解决上述问题。文献综述

病毒的侵染性克隆，是指人工获得的具有侵染活性的病毒体外转录RNA或者是具有转录活性的病毒cDNA或DNA，一般都可以通过细菌质粒来进行大量复制，并可通过现代分子生物技术进行基因的突变、插入，实现表达基因的编辑[9]。病毒侵染性克隆是研究病毒功能及植物互做的基本技术平台，该技术的广泛应用推动了病毒学，病理学，遗传学的研究。

在本实验材料pCAMBIA2300-CymMV FL表达载体构建完成后，利用农杆菌介导法在寄主本氏烟上进行接种侵染，并通过症状观察法、RT-PCR法、Southern blot技术等对其侵染效力进行检测；只有证明了该表达载体具有侵染能力，CymMV侵染性克隆才算构建成功。源:自'优尔.·论,文;网·www.youerw.com/

1.1材料与方法

1.1.1 植物材料

野生型本氏烟（Nicotiana benthamiana）为本实验室保存。