2.1.2主要仪器及设备

2S-75HJ型高压灭菌锅                     江阴滨江医疗设备有限公司

HD-930型组合式全温摇床                  太仓市博莱特实验仪器厂

SPX-250B生化培养箱                     上海佳胜实验设备有限公司

SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台           苏州净化设备有限公司

高速冷冻离心机HR21M                   湖南赫西仪器设备有限公司

电子天平BS210S                         北京赛多利斯天平有限公司

DYY-10C型凝胶电泳仪器                  北京市六一仪器厂

HD-930DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱   上海精宏实验设备有限公司

ZF1-Ⅰ多功能紫外分析仪                   上海汗诺仪器有限公司

雷磁pHS数显pH计                       上海精密科学仪器有限公司

Universal HoodⅡ凝胶成像仪                Bio-Rad

EPED-E2-10TF纯水仪                     南京易普易达科技有限公司

HH-S恒温水浴锅                         金坛市亿通电子有限公司

    SH2-Ⅲ型循环水真空泵                    上海亚荣生化仪器厂

FM-50型雪花制冰机                      上海比郎仪器有限公司

WH-3微型漩涡混合仪                    上海泸西分析仪器有限公司

MS300磁力搅拌器                       上海般特仪器有限公司

电转移                                  eppendorf公司

2.1.3酶和主要试剂文献综述

柠檬酸缓冲液：柠檬酸 210g/L，调节pH至3.8，然后按1：19比例稀释至pH值为4.8。

2%CMC溶液：称取2g CMC-Na,加入约80ml柠檬酸缓冲溶液，50℃边水浴边搅拌溶解，溶解后定容至100ml,置于冰箱。

2.2试验方法

2.2.1主要试剂以及培养基的配制

BMGH：1 % 甘油、7.5 g/L YNB、4×10-5  % 生物素、0.1M磷酸钾缓冲液(PH8.0)，121℃灭菌20 min，其中YNB和生物素需要过滤除菌。

BMMH：0.5 %甲醇、7.5 g/LYNB、4×10-5 %生物素、0.1 M磷酸钾缓冲液(PH8.0)，121℃灭菌20 min，其中YNB和生物素需要过滤除菌。

2.2.2初始PH值优化 

BMGH培养基和BMMH培养基的初始pH值默认为8.0，而纤维素酶的最适pH值一般在4.0 到6.0之间，在pH为 8.0时酶活力可能受到影响。有报道指出毕赤酵母表达系统在不同的初始pH值下表达不同的外源蛋白差异显著 [123]。因此我们调整BMGH和BMMH培养基的初始pH值分别为3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，分别测定上清的纤维素酶酶活，以确定最适初始pH值。

2.2.3 BMGH培养基碳源优化

我们观察到BMGH培养基中的甘油浓度对重组巴斯德毕赤酵母向培养液中分泌的重组酶活力和蛋白产量影响很大，因此我们在BMGH培养基中尝试使用不同的甘油浓度，0.5%、1.0%、1.5%、2.0%和2.5%，分别测定上清的纤维素酶活和细胞干重，以确定最适的甘油浓度以及对重组细胞生长的影响。来.自/优尔·论|文-网·www.youerw.com/