1.3 DNA常用提取方法

自从1869年瑞士生物学家Friedrich Miescher从脓细胞的细胞核中分离出了一种含磷酸的有机物,当时称为核素（nuclein），后称为核酸（nucleic acid）以来，大量的核酸的提取方法陆续问世。快速、经济地从植物样品中提取高质量的基因组DNA是植物分子生物学研究的首要问题。针对植物基因组DNA的提取，除了传统的CTAB法[13]，SDS法[14]等，研究人员还针对各种植物的不同特性，对这些方法进行优化，使之更具有针对性，能更有效的提取纯度较高的DNA。文献综述

CTAB (Cetyltrimethyl ammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子去污剂，在高盐下能与核酸结合形成复合物。此复合物在高盐(>0.7 mol/L)浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度(0.1～0.5mol/L NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。通过有机溶剂抽提，去除蛋白质、多糖、酚类等杂质后，加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。但是，传统的CTAB法对复杂结构的植物组织提取效果较差，且不能应用于大量样品的提取。戴剑等[15]利用改良的CTAB法，减少了液氮的使用，不仅降低了损耗，更节省了时间。快速高效的提出了纯度较高的小麦叶片DNA。张秀杰等[16]在提取蜂蜜DNA时，由于蜂蜜中糖含量较高，先用PBS缓冲液出去多糖，又提高了CTAB缓冲液中的NaCl的浓度以除去残余多糖，提取得到了片段完整、纯度较高的DNA。

SDS (Sodium Dodecyl Sulfate，十二烷基磺酸钠)是一种阴离子强表面活性剂，在高温（55-65℃）条件下能裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸。之后的操作有两种方法：一种是使用氯仿等有机溶剂抽提蛋白质和糖类；另一种是提高盐浓度（加入KAc或NH4Ac）并降低温度（冰浴），使蛋白质杂质沉淀。但是第2种SDS法所提DNA常含有较多的多糖，因此有很大的局限性。卢东柏[17]等在SDS提取缓冲液中加入抗氧化剂，解决了棉花DNA提取质量不高且容易褐变等问题；

除了传统的CTAB法和SDS法及其改良之外，还有许多高效的DNA提取方法。Salah M. Aljanabi等[18]的高盐法能作用于动物组织和植物组织，并且均能得到片段完整，纯度较高的DNA；试剂盒法提取DNA也得到了广泛的应用。近年来，利用纯化柱和玻璃粉纯化植物基因组DNA也有报道。为了实现核酸提取的安全、简便、高效，可以预见，今后的基因组DNA提取将趋向于非有机溶剂替代有机溶剂，实现批量操作，逐步实现自动化。

1.4本研究的目的与意义

近年来，食品安全问题引起人们的广泛关注，蜂花粉领域同样存在安全问题。随着市场的扩大，有的商家在油菜蜂花粉制品中加入颜色相近玉米粉或其他添加剂来降低成本。在蜂花粉中，油菜蜂花粉较为常见且价格较低，有的商家在价格较高的蜂花粉制品中混入油菜蜂花粉，以次充好。蜂花粉国家标准(GB/11758—89)，仅依据蜂花粉质量技术指标，从感官指标及理化指标两个方面对蜂花粉分等，与目前蜂花粉繁荣、混乱、良莠不齐的市场现状极不匹配。为了更深入，更准确的鉴定蜂花粉是否为单一蜜源花粉以及是否含有其他添加剂，我们可以通过对其核酸进行定性定量检测。来~自^优尔论+文.网www.youerw.com/

因此，本文重点对油菜蜂花粉的核酸的提取进行研究。以传统提取植物基因组DNA的方法为根本，借鉴前人经验，加以改良，并通过PCR扩增油菜内标准基因PEP进行定性检测所提DNA是否为基因组DNA。通过分析比较，选出一种较优的油菜蜂花粉DNA提取方法。希望本文能成为加强蜂花粉质量的检测的参考依据。