0.3

30 1

琼脂糖/g 0.25 0.65

0.5×TBE/mL 25 65

2.4.5引物设计

表2-4 PCR引物序列

位点 引物对（5′- 3′） 退火温度（℃）

P1 F:ATACTGGAAAGTGTGCTTGGA

R:TCGTTAGGCATGTCACCTCTAC 58

P2 F:ACCAGACGAGCTACTCACAAA

R:GTGGTCAGAGTATTACTAGGCACT 58

2.4.6 PCR最佳反应条件的筛选

采用基本的PCR扩增程序对所有位点进行扩增，循环的次数和循环中72℃的延伸时间可根据扩增片段的大小不同做稍许变动，循环次数本实验一般为35次，延伸时间一般500 bp以下40～60 s就可以。为了追求更好的扩增效果，本研究经试验后最终决定采用30s的延伸时间