引言 5

1 材料与方法 6

1.1  实验材料 6

1.2  实验方法 6

1.1.1 引物设计sHSP及内参引物 6

1.2.2预实验.6

1.2.3 菌体的处理 6

1.2.4 RNA提取前的准备 7

1.2.5 RNA提取..7

1.2.6 cDNA的制备 8

1.2.7 实时荧光定量PCR 8

2  结果与分析 9

    2.1不同渗透胁迫条件下，两种热激蛋白的基因表达水平以及它们之间的差异 9

2.2不同发育水平条件下，两种热激蛋白的基因表达水平以及它们之间的差异 10

2.3不同冷热压力条件下，两种热激蛋白的基因表达水平以及它们之间的差异 11

2.4不同氧化压力条件下，两种热激蛋白的基因表达水平以及它们之间的差异 11

2.5不同营养水平条件下，两种热激蛋白的基因表达水平以及它们之间的差异 12

3  讨论 13

3.1 研究意义 13

参考文献： 14

致谢 14

引言

构巢曲霉（Aspergillus nidulans）是遗传学中研究最广泛的生物之一，通常会被用来进行基因功能鉴定。构巢曲霉中新发现了3种热休克蛋白，分别是HSP92，HSP81，sHSP7。本实验研究了构巢曲霉的HSP81和sHSP7的遗传进化分析。论文网

细胞或者是生物体在一定时间（几小时、几分钟、甚至几秒钟）遭受到比自身正常生长温度还要高上8℃—12℃时会新合成或增加体内某种蛋白，这类蛋白叫做热激蛋白（Heat shock protein），也叫作热休克蛋白或者应激蛋白[1]；而前面所说的引起热激蛋白生成或者含量增加的温度通常称为亚致死温度。热休克蛋白是在1962年被遗传学家Ritossa发现的。热休克蛋白具有高度的保守性，存在于很多生物中，比如原核生物、高等真核生物等[2]。热休克蛋白与生物体的耐热性能相关，它除了能被高温所诱导之外，同样能被许多其它类型的胁迫所诱导产生，比如说紫外线、低温、重金属盐、氨基酸类似物、氧自由基等[3]；热休克蛋白在细胞正常的代谢中起到蛋白的折叠、组装、转运以及降解的功能。当生物机体或者说是细胞遭受胁迫能够产生热休克蛋白或者增加热休克蛋白的含量，使其与非蛋白质发生反应来防止为折叠蛋白变性，还可以促使已经变性了的蛋白质溶解复性，最终达到维持细胞稳态的目的[4]。根据已知的热休克蛋白的分子量大小可以将其分为6大家族，分别是HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小热休克蛋白（sHSP）和泛素[5]。

热休克蛋白90（HSP90）家族是这六大家族中的重要成员之一，HSP90的分子量约为83-90kDa，大多存在与细胞浆中，是正常细胞的组成成分，是真核细胞胞质中最丰富的蛋白质之一。HSP90具有四中亚型，分别是HSP90α，HSPβ，GRP94以及HSP75。HSP81则属于HSP90家族。HSP90除了具有稳定的蛋白质结构、参与细胞周期调控的作用，还与类固醇受体及肌动蛋白结合，发挥调节作用。一般认为，HSP90先与类固醇受体形成复合物，这一过程能够防止类固醇受体和靶基因之间不适应作用，除此之外，这一过程也是类固醇受体完成正确折叠和装配过程种的其中一个必须进行的前期步骤。HSP90除了这一功能外还能够调节某些蛋白激酶，如PKC激酶。HSP90能使在各种应激反应中积累的折叠出错的蛋白质再折叠，并使得已经突变的蛋白质进行降解，所以HSP90还在应激损伤方面起到了重要的作用；HSP90对于细胞凋亡、免疫作用及肿瘤有很大的影响，HSP90呈现持续的高诱导表达，其表达比正常细胞高2—10倍，所以HSP90在肿瘤和自身免疫性等疾病治疗中发挥了重要作用。而本次构巢曲霉新发现的HSP81就属于HSP90家族。