在种子休眠过程中,选用次生休眠性特强和特弱的水稻品种,主要研究次生休眠性差异的水稻品种中蔗糖和可溶性总糖含量的变化,弄清休眠种子与非休眠种子中含糖量水平的差异,为优良水稻品种的育种和栽培提供参考依据。
2 材料与方法
2.1 实验材料
供试水稻品种:成熟早、品质优良,增产潜力大、适应性广、稳产性好、容易脱粒、好栽培的来自我国不同生态区的6个水稻主栽品种,种子贮藏在15℃条件下保存备用
供试试剂:80%乙醇、2N 氢氧化钠、0.1%间苯二酚、10N氯化氢、0.2%蒽酮、去离子水
2.2 水稻种子萌发培养
将备用的培养皿进行121℃高压灭菌20分钟,烘干,待培养皿冷却后垫两层滤纸备用,精选饱满的供试品种水稻种子各50粒于培养皿中,加入10ml蒸馏水,贴上标签。若培养皿中滤纸没有贴合培养皿底部而产生气泡,可用枪头将气泡赶出。将培养皿放进8℃的恒温箱中培养七天,在培养过程中定期检查并加水。七天后取出培养皿,用镊子去除根芽,将留下的种子放入试管保存于超低温中。
2.3 水稻籽粒中蔗糖与可溶性总糖提取与含量测定来,自|优;尔`论^文/网www.youerw.com
用热乙醇法[7]提取蔗糖和可溶性总糖,蔗糖含量用间苯二酚法[8]测定,蒽酮比色法[9]测定可溶性总糖含量。具体提取和测定过程如下,所得结果为三次重复的平均值。将水稻种子剥皮,过100目筛,称取0.1g样品,加入10ml80%乙醇80℃水浴30min,冷却后以转速为2000rpm/s离心15min,将上清液与残渣分离,向残渣中加入10ml80%乙醇重复上述步骤三次,合并三次离心后的上清液并定容至50ml。
蔗糖的测定:用移液管吸取上述提取液0.9ml至试管中,加入2N NaOH 溶液0.1ml,沸水浴10min,待样品冷却后,加入0.1%间苯二酚1ml以及10NHCl溶液3ml,沸水浴10min,待样品冷却,以去离子水校零,测其波长为500时的OD值。
可溶性总糖测定:用移液管吸取上述提取液1.0ml至试管中,加1.0ml水和0.2%的蒽酮4ml,沸水浴15min,待冷却,以去离子水校零,测其波长为620时的OD值。