生物碱是国内外学者最早从石斛中分离得到的成分。1994年，丁亚平等[6]测定安徽霍山3种石斛(霍山石斛，铜皮石斛，铁皮石斛)中石斛碱的含量，发现三种石斛茎部总生物碱的含量分别为0.029%，0.028%，0.240%；3种石斛的石斛碱含量呈现的规律是：叶>茎(成熟期)>根。姚睿的文章中指出原球茎中生物碱的分布量最多，其次是叶，茎中最少，生物碱主要位于原球茎中的薄壁细胞，茎的薄壁细胞内及叶片的叶肉细胞中[5]。

1.3.3氨基酸

经过不断深入研究，国内外的学者就发现铁皮石斛内的氨基酸也是重要的作用物质。吴庆生等[7]曾对安徽霍山产的三种石斛品种中的游离氨基酸进行定量分析，发现三种石斛中都含有人体必需的七种氨基酸，其中含有的主要氨基酸有天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）、亮氨酸（Leu）。

1.4 铁皮石斛组织培养研究

在铁皮石斛的组织培养中，常用的外植体有种子、茎段、叶片、根等在不同的培养条件下都可以诱导得出原球茎。谢启鑫等[8]用铁皮石斛未开裂的成熟果荚作为外植体，接种到MS、1/2 MS、花宝1号3g/L的无激素萌发培养基上进行诱导，结果表明1/2 MS基础培养基最适合铁皮石斛的种子培养，45 d时原球茎诱导率达到95%，因此我们可以得出诱导培养基应以盐分较低的1/2 MS最为合适。

激素对植物细胞分裂、诱导根茎叶等器官的形成及其次生代谢物的合成都有重要作用。植物提取汁对铁皮石解的生长也有明显的作用。张治国等[9]研究了不同培养基、蔗糖浓度、天然提取物和激素条件对原球茎分化情况，认为1/2MS的基础培养基最适宜其分化，蔗糖以2%的浓度最为适宜，天然提取物则以马铃薯提取物最合适；在分化前期，高浓度的BA和低浓度的NAA可加快原球茎分化。

1.5 研究目的来!自-优.尔,论:文+网www.youerw.com

针对铁皮石斛野生资源严重枯竭，人工栽培周期长，产量易受到外部环境因素的影响等问题，利用植物组织和细胞培养技术——原球茎诱导、增殖分化来培养铁皮石斛，使其生长迅速，周期短，提高繁殖系数，使药用植物铁皮石斛得以实现工业化生产，无需占用耕地，不受地区和季节的限制。且植物细胞培养都是在无菌条件下进行，可以排除病菌和虫害的侵扰，并且无污染，无重金属积累，能进行重复生产，有利于铁皮石斛质量严格控制，产物分离、提取操作，相对简单。本实验研究影响铁皮石斛原球茎生长和生物活性物质积累的诸多因素，旨在用原球茎代替铁皮石斛野生及栽培植株作为药材新来源，为药用材料生产提供一条新途径。本研究对铁皮石斛资源的保护、开发和利用具有积极的影响。

二、材料与方法

2.1选材

本实验的实验材料选自于杭州富阳铁皮石斛经实验室处理后形成的无菌苗。