NIS-Elements F 4.00.00软件

爪蟾视觉逃避行为密闭装置（自组装）

Math Works，Pychophysics toolbox(MATLAB)

恒温培养箱：福意联，北京福意电器有限公司  

2.1.3试剂的准备

   10X Steinberg’s Stock：119g Hepes，34g Nacl，2.06g magnesium sulfate， o.8g calcium nitrate，0.5g potassium chloride，1liter water pH7.5

   MS222：500mL Steinberg’s Solution和0.1g MS222 powder混匀，调节pH至7.4。

   TSA：取1ul TSA溶于100ml Steinberg’s Solution 配制成50nM的TSA

   MC1568：取1mg MC1568 溶于3.1816ml DMSO中制备成1mM的储备液。

   MS275:取1mg MS275 溶于2.6567 ml DMSO中制备成1mM的储备液。

2.2方法

2.2.1不同时期蝌蚪的尾部再生规律

    包括人类在内的哺乳动物具有及其有限的再生能力，然而以蝾螈、非洲爪蟾等为代表的两栖类动物则在特定时期能完全修复缺损的组织器官[9]。首先，通过对一雄一雌的非洲爪蟾进行配对，雌蛙注射600 IU，雄蛙注射300 IU，诱导交配。当蝌蚪幼体成长到34-35期、40-41期和46-47期时[10]，分别对这几个时期的蝌蚪进行试验。在实验中分别选取34-35期、40-41期和46-47期体表无损、活力良好得蝌蚪个体各20只，各时期取10只蝌蚪置于MS222中麻醉后，放入显微镜中进行切尾手术，手术结束后放入10X Steinberg’s Stock培养液中每日进行观察其尾部的恢复情况，另一组不进行任何处理放入相同的10X Steinberg’s Stock培养液中进行对照观察。蝌蚪的培养均放在20℃恒温培养箱中。每个实验在相同条件下重复三次。文献综述

   （2）组蛋白去乙酰化酶拮抗剂实验

    首先，通过对一雄一雌的非洲爪蟾进行配对，雌蛙注射600 IU，雄蛙注射300 IU，诱导交配。当蛙卵成长到第34-35期时，对这个时期的蝌蚪进行试验。

    a.  TSA抑制剂

取新六孔板一个并进行相应标记，将配置好的母液为50nM的TSA抑制剂，分别取0、2、4、8ml于六孔板中，再用10X Steinberg’s Stock分别加入8、6、4、0ml将TSA抑制剂稀释成浓度为0、12.5、25和50nM 备用。在实验中选取体表无损、活力良好的蝌蚪个体40只并进行尾部切除手术，各选10只分别置于配置好的TSA浓度六孔板中培养。蝌蚪的培养均放在20℃恒温培养箱中。连续拍照7天进行追踪，观察蝌蚪生长发育及尾部恢复情况，找出抑制剂处理蝌蚪的最佳浓度。每个实验在相同条件下重复三次。

    b.  MS275

    取新六孔板一个并进行相应标记，将配置好的母液为1mM的 MS275，分别取0、20ul、40ul、80ul于六孔板中，再用10X Steinberg’s Stock分别加入8、8、8、8ml将MS275稀释成浓度为0、2.5、5和10μM备用。在实验中选取体表无损、活力良好的蝌蚪个体40只并进行尾部切除手术，各选10只分别置于MS275浓度为0、2.5、5和10μM的六孔板中培养。蝌蚪的培养均放在20℃恒温培养箱中。连续拍照7天进行追踪，观察蝌蚪生长发育及尾部恢复情况，找出处理蝌蚪的最佳浓度。每个实验在相同条件下重复三次。

    c.  MC1568

    取新六孔板一个并进行相应标记，将配置好的母液为1mM的 MC1568，分别取0、20ul、40ul、80ul于六孔板中，再用10X Steinberg’s Stock分别加入8、8、8、8ml将MC1568稀释成浓度为0、2.5、5和10μM。在实验中选取体表无损、活力良好的蝌蚪个体40只并进行尾部切除手术，各选10只分别置于MC1568浓度为0、2.5、5和10μM的六孔板中培养。蝌蚪的培养均放在20℃恒温培养箱中。连续拍照7天进行追踪，观察蝌蚪生长发育及尾部恢复情况，找出处理蝌蚪的最佳浓度。每个实验在相同条件下重复三次。