DPPH自由基的化学结构

本次实验采用分光光度计法,DPPH自由基清除计算公式一般为:

DPPH自由基清除率/%= ×100

式中:A 是没有加样品的DPPH自由基吸光度; 是已经加入样品的DPPH自由基吸光度。

2。3。2  Folin-Ciocalteu 比色法文献综述

     原理:由于 Folin-Ciocalteu 试剂中的钨钼酸能够将多酚化合物定量氧化,自身被还原(使W 6+变为W5+)生成蓝色的化合物,颜色的深浅跟多酚含量呈正相关,因此可以通过该比色方法来对多酚进行定量检测。

2。2。3  亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法

     原理:在中性或弱碱性的条件下,将亚硝酸钠溶解于溶液中时,加入黄酮类化合物,会与钠盐发生反应生成螯和物,生成的螯合物再与氢氧化钠溶液反应,氢氧化钠使黄酮类化合物开环,生成 2’-羟基查耳酮,从而使溶液变成红橙色,在500nm波长处能够测得有吸收峰,与槲皮素标准系列比较确定含量。

2。4 实验步骤 

2。4。1 粗提取

     取已干燥的何首乌块根,用破碎机切碎,将叶子碎片用95%乙醇水溶液回流提取,总共提取三次,每次提取时间大约3h;将回流提取后的液体用旋转蒸发仪浓缩,所得即为总浸膏,取部分总浸膏,留存。其余部分用水溶解,依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等体积萃取,各萃取三次。(二氯甲烷、乙酸乙酯均为工业纯,经重蒸后使用;正丁醇为分析纯),将三种萃取液进行浓缩,分别得到浓缩过后的二氯甲烷相粗提取物、乙酸乙酯相粗提取物、正丁醇相粗提取物。将剩余水溶液浓缩,得到水相粗提取物。

2。4。2 DPPH法测抗氧化活性

    1。DPPH溶液的制备:精密称取DPPH粉末3。16mg,置于离心管内,用10mlL无水乙醇溶解,配成浓度为0。80 10 mol/L 的DPPH乙醇溶液,用黑色塑料包裹,放置于黑暗处保存,备用。

    2。维生素C清除DPPH自由基[18]的测定:精密称取维生素C1。0mg,置于离心管中,用1m无水乙醇溶解,配成浓度为1mg/mL的维生素C储备液。取维生素C储备液适量,分别加入无水乙醇,对照品溶液按浓度梯度逐步稀释成质量浓度分别为80、40、20、10、5μg/mL的维生素C系列。分别取上述各质量浓度维生素C对照品溶液50μL,与DPPH溶液150μL,均匀点在96孔细胞培养板上,放置30 min后,于515 nm处测定其吸光度A。参照公式“DPPH清除率=[1一(As一A空)/(A0一A空)]×100%”计算清除率。式中:As为样品与DPPH溶液反应后在515 nm处观测到的吸光度,A空为溶剂在515 nm观测到的吸光度。

    3。何首乌各萃取组分制备:分别称取二氯甲烷相粗提取物、乙酸乙酯相粗提取物、正丁醇相粗提取物,总浸膏16mg,置于离心管中,加入1mL甲醇溶液溶解,配成16mg/mL的试样。采用倍半稀释的方法将试样稀释得到8mg/mL、4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0。5mg/mL、0。25mg/mL、0。125mg/mL、0。0625mg/mL的稀释试样。保存,备用。

    4。何首乌中不同萃取组分清除DPPH自由基能力测定:将3中所得到的不同的质量浓度试样品各50μL,分别加入DPPH溶液150μL于96孔细胞培养板上,放置30min,于515nm处测定其吸光度A。参照公式“DPPH清除率=[1一(As一A空)/(A0一A空)]×100%”计算清除率。式中:A为不同萃取组分与DPPH溶液反应后在515 nm处观测到的吸光度,A0为未加试药的DPPH溶液在515 nm观测到的吸光度,A空为溶剂在515 nm观测到的吸光度。以质量浓度为横坐标、清除率为纵坐标绘制何首乌不同萃取组分二氯甲烷粗提取物、乙酸乙酯粗提取物、正丁醇粗提取物,总浸膏对DPPH自由基的清除曲线。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

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