2 材料与方法

2。1 实验材料

地钱的配子体和雌托如图1。1。材料采集地点为中国浙江省天目山国家级自然保护区，标本凭号（配子体-2015070447；雌托-2015042116）保存在杭州师范大学生命与环境科学学院植物标本室（HTC）。

 地钱配子体（A）和雌托（B）

材料处理：将采集的新鲜地钱的雌托和配子体，用清水冲洗干净后置于阴凉通风处阴干。再置于75℃ 烘箱烘烤48 h，待材料完全干燥后，研磨粉碎待用。地钱雌托处理后标本见图1。2。

 地钱雌托处理标本

2。2 实验试剂、仪器

本实验所用试剂见表格1。1。

表格1。1 实验试剂

Table 1。1 The rengents

试剂名称 生产商

芦丁（Rutin> 98%) Sigma Co。

氯化硝基四氮唑蓝(NBT) Sigma Co。

2,2'-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS) Sigma Co。

乙酰胆碱酯酶(AChE) Sigma Co。

碘化硫代乙酰胆碱 (ATch) Sigma Co。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH) Sigma Co。

5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB) Sigma Co。

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH） Sigma Co。

吩嗪硫酸甲酯(PMS) 上海阿拉丁试剂有限公司

2,4,6-三吡啶基三嗪（TPTZ） 上海阿拉丁试剂有限公司

十二烷基硫酸钠(SDS) 北京博大泰克生物技术有限公司

本实验所用仪器见表格1。2。

表格1。2 实验仪器

Table 1。2 The instruments

仪器设备 型号 生产厂家

微量可调移液器 2。5，10，100，1000 Eppendorf

纯水仪 ELix MILLIPORE文献综述

高速离心机 HERAEMS Thermo Electron

电子天平 BS323S Sartorius

电子天平 FA2004 上海精密科学仪器有限公司

pH计 Phs-25 上海英格仪器有限公司

旋转蒸发仪 RE-52C 上海青浦沪西仪器厂

超声仪 RICHD 上海睿祺电子设备有限公司

水浴锅 HWS26型 上海-恒科技有限公司

循环水式多用真空泵 SHB-Ⅲ 郑州长城科工贸有限公司

电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9053A型 上海-恒科技有限公司

2。3 总黄酮提取液的制备

2。3。1）用电子天平准确称取样本1g于50ml锥形瓶中，加入25mL 50% 乙醇，50℃恒温水浴锅内水浴2h；

2。3。2）水浴后超声提取20min，真空泵抽滤，收集滤液；

2。3。3）在滤渣中加入25mL 50% 乙醇溶液，重复以上两个步骤；