2  结果与分析 8

2。1贴壁培养的人肝癌HepG-2细胞 8

2。2姜黄素能诱导HepG-2细胞XAF1基因mRNA转录水平升高 9

2。3 pGreen-Puro-XAF1 shRNA 载体的构建策略 9

2。4构建的pGreen-Puro-XAF1 shRNA 表达载体PCR鉴定结果 9

2。5构建的pGreen-Puro-XAF1 shRNA 表达载体测序鉴定结果 10

2。6转染细胞的筛选及稳定干扰HepG-2细胞系的建立 11

3  讨论 11

参考文献： 12

致谢 12

引言

肿瘤是全球发病率最高的疾病之一。据全国肿瘤登记中心发布的《2012中国肿瘤登记年报》报道，每年新发肿瘤病例约为312万例，平均每天8550人，全国每分钟有6人被诊断为癌症。恶性肿瘤发病率全国35岁至39岁年龄段为87。07/10万，40岁至44岁年龄段几乎翻番，达到154。53/10万；50岁以上人群发病占全部发病的80%以上，60岁以上癌症发病率超过1%，80岁达到高峰。全国肿瘤死亡率为180。54/10万，每年因癌症死亡病例达270万例。我国居民因癌症死亡的几率是13%，即每7至8人中有1人因癌死亡。肿瘤死亡率男性高于女性，为1。68:1。其中死亡率较高的为肺癌、肝癌、胃癌等常见的癌症。原发性肝癌，也成为肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma ,HCC），是世界上流行的恶性肿瘤之一。目前癌症的治疗主要是放疗、化疗和手术，预后较差，且病人需要承受较大的痛苦。因此，我们迫切需要寻求一种能够替代化疗、放疗，有效控制癌症的方法。中药是我国传统中医特有药物，很多中草药的疗效不但经受住了长期医疗实践的检验，而且也已被现代科学研究所证实。部分中药表现出了很好的预防和治疗肿瘤的功效，姜黄素（curcumin）就是其中之一。论文网

姜黄(Curcuma longa)，又被称为黄姜、宝鼎香，是姜科多年生草本植物。印度是姜黄的主要产地之一，90%的姜黄在食品工业被作为添加剂、防腐剂、调味剂和着色剂使用[1]。在我国，姜黄也是一种常见的中草药。千百年来，姜黄都一直被用于治疗病毒感染、风湿肿痛、呼吸系统疾病等，具有抗菌，消炎的作用。此外，姜黄也被认为具有抗关节炎、抗肿瘤、抗血栓、降血糖、护心、保肝等功能[2]。姜黄中的主要化学成分是姜黄素，是一种多酚类色素，主要以二酮的形式存在，化学结构如图1所示。 1985年，印度kuttan等首次提出姜黄素具有抗肿瘤的活性[3]。近几十年来，姜黄素得到了广泛的研究和关注。国内外的相关研究发现，其作为一种天然抗氧化剂，具有抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的特性[4-5] 。姜黄素抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡的相关研究已在胆囊癌、结肠癌、乳腺癌、头颈部癌、肺癌等常见癌症中取得了相应的研究成果。

图1 姜黄素的化学结构

X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked Inhibitor of Apoptosis，XIAP）是IAP家族的重要成员，包含3个BIR结构域和1个RING结构域。其中BIR结构域能够直接结合并抑制下游的Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9，进而抑制细胞凋亡。正常情况下，凋亡信号到达线粒体之后，释放出细胞色素c（cytochrome c）的同时，还会释放出一种IAP负调节因子Smac/Diablo，通过拮抗IAP家族成员尤其是XIAP促进细胞发生凋亡。已有研究报道，在肿瘤细胞中XIAP处于高表达状态，因此，XIAP也成为肿瘤药物设计的一个新靶点。最近研究发现，除了Smac，细胞内还存在另外一种XIAP的负调节因子X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1（XIAP-associated factor 1，XAF1）[6-9]。XAF1直接和内源性的XIAP结合，通过降低XIAP抗Caspase的活性，促进细胞凋亡。研究显示，XAF1基因在胚胎组织和成人正常组织中正常表达，但是在多种肿瘤细胞中表达低下甚至不表达。在NCI（美国国立癌症研究所）60种肿瘤细胞系中均发现XAF1 mRNA表达水平较低，呈现转录抑制[10]。