2。6 鸡蛋样品处理
样本采集:分别于农贸市场、超市、养殖场随机收集不同批次鸡蛋各10个,放在清洁 袋中带回实验室,0℃-4℃下保藏(不清洗),实验在3-5d内完成。
抗生素标准溶液的制备:准确称取青霉素标准品0。18g,超纯水定容至100mL,备用。用 超纯水将定容好的青霉素溶液稀释成 0。005μg/mL、0。0055μg/mL、0。006μg/mL、0。0065μg/mL 的标准溶液。
样品的制备:取样品无抗鸡蛋敲碎去壳,搅拌,取蛋清10mL,加入30mL含有不同浓 度青霉素的超纯水,不断搅拌,保鲜膜密封口后置于沸水浴上加热 15min,蛋清溶菌酶在 碱性(样品pH为8)条件下,受热会失去活性[20-21],取出冷却至室温,再次搅拌,滴加10% 的柠檬酸水溶液,调节pH为6。5,此为检测样品。
2。7 试剂盒研制方法
2。7。1 技术要求
(1)出发菌株无毒,无抗生素质粒、热抗稳定,安全无毒。选用嗜热脂肪芽孢杆菌 无抗生素质粒菌株,菌株无毒,在室温下不生长,安全可靠。
(2)为市场上针对禽蛋中抗生素检测的专一试剂盒,适用于禽蛋中多种抗生素残留 的定性检测。本产品专门针对禽蛋产品,克服了溶菌酶对抗生素检测的影响问题。
(3)成本低,操作简便,适合非专业人士使用。来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*
(4)采用微型加热控温装置,解决了菌种生长对温度要求较高,家庭难以自行掌控 的难题,适用于一般禽蛋养殖场和家庭消费者。
2。7。2 主要试剂和装置
试剂盒由1。5mL反应管(doff管)、微型加热控温装置(包括绝缘材料、加热块)、菌种、 检测培养基、微型滴管、试剂和说明书等组成。专门针对禽蛋抗生素残留的检测开发,操 作简便,无需专业知识,适合企业和家庭多类人群。
2。8 抗生素快速检测
自制试剂盒检测:将试剂盒中加热装置接通电源后调节到90℃,向含有指示菌株芽孢
(干粉)的1。5mLdoff管中(菌体数量为108-109cfu/mL),加入0。9%的无菌生理盐水0。3mL, 置于加热块上的加热孔中,活化培养20min后,加入 0。1mL检测培养基,0。2mL经上述处理 的待测蛋清样品,调节加热装置温度到65℃恒温培养3h,观察培养基颜色变化情况,判断 测试样品中抗生素情况。