钙 260。0mg

铁 11。0mg

锌 0。8mg

铜 0。25mg

磷 4。3mg

1 材料与方法         

1。1供试材料

1。1。1肿瘤细胞株

人肝癌细胞HepG2一直由本实验室传代保存。

1。1。2实验材料

辣椒叶采集自种植菜园。

1。1。3实验试剂

Alamar blue粉末、碘化丙啶粉末、Hoechst33258购自美国Sigma公司产品；RPMI-1640细胞培养粉末购自invitrogen生物技术有限公司；胰蛋白酶粉末购自南京生兴生物技术有限公司；Annexin V-FITC/PI双染凋亡检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所；其他所使用的试剂为国产分析纯。文献综述

1。1。4实验使用仪器

CO2培养箱、-80℃冰箱美国Thermo公司产品；IBE2000显微镜 重庆光学仪器厂；Synergy II 多功能酶标仪 美国Biotek公司；正置荧光显微镜 德国莱卡公司产品；流式细胞仪BD公司产品；液氮罐 美国Thermo公司产品；超纯水系统 Millipore公司产品；高速冷冻离心机 德国贝克曼公司产品。

1。2 实验方法

1。2。1 辣椒叶提取物的提取

将辣椒叶洗净，切碎，用家用榨提取物机榨汁， 4°C，5000rpm离心10min，取上清，-20°C冰箱保藏备用。

1。2。2细胞培养

细胞复苏（1）从液氮罐中将冻存的细胞取出，37℃水浴锅中快速化冻，通过不断摇动加速溶解。

（2）将溶液后的细胞转入一个已经准备好的含有8ml新鲜培养基的灭菌离心管中。

（3）1000rpm，离心5min，弃上清，加入细胞培养液，轻轻吹散细胞，制成细胞悬液，将细胞浓度调整为大约5×105个/ml。

（4）将上述细胞悬液转移到已经加入新鲜培养液的培养瓶中， 37℃，5% CO2培养箱中培养，第二天更换培养基除去死细胞和剩余的冻存液。

细胞传代来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

（1）待培养瓶中的细胞密度达到85-90%时，倒掉旧培养液，用灭菌的PBS洗两次。

（2）加入抽滤过的0。25%的胰酶消化液，培养箱放置消化3-4min。

（3）显微镜下观察细胞形态的变化，当细胞细胞形态收缩变圆时，立即加入一定量的含胎牛血清的细胞培养基，终止消化。

（4）将上述瓶中的细胞培养液移至10ml玻璃离心管中，1500rpm，离心5min，弃上清液。

（5）重新加入新鲜的细胞培养液，反复吹打细胞，制成悬液。

（6）细胞计数，调整合适的细胞密度，传代细胞培养板或新细胞培养瓶中，37℃，5% CO2培养箱中培养。