2、今年的8月13日日本富山县立大学的浅野泰久教授所在的小组提出了马陆含有一种制取某些医用和农用药物所需的酶，且在它们身上提取这种酶的效率比常规方法更高。该小组通过实验已确定该酶为羟基扁桃腈裂合酶，可用于制造某些消炎及心脏病药物和农药，并发现该成分比在杏仁中提取到的稳定性好且具有效率高的特点。

实验部分

一、实验目的

    马陆是一种传统的中药材，体内含有大量的活性成分，三峡大学化学与生命科学学院天然产物研究与利用湖北省重点实验室提出马陆提取物对宫颈癌Caski细胞具有抑制从而达到治疗的效果，日本富山县立大学的浅野泰久教授所在的小组发现马陆体内有羟基扁桃腈裂合酶，可用于制造某些消炎及心脏病药物和农药，我们希望通过进一步研究，找到马陆体内具有抗肿瘤活性的天然产物。

二、器材与试剂论文网

原料：2015年10月取自泉山森林公园的健康马陆2000条。

器材：旋转蒸发仪（EYELA OSB-2100）、水泵（EYELA）、柱层析（CC）、硅胶（二氧化硅，200-300目，10-40毫米，烟台）、ODS（40-63毫米，YMC）、薄层色谱、预镀硅胶F254板块（烟台）。

试剂：石油醚（分析纯）、乙酸乙酯（分析纯）、正丁醇（分析纯）、水、二氯甲烷（分析纯）、甲醇（分析纯）、乙醇、氯仿。

三、实验步骤

1、物质粗提取

 ① 将2000条健康的马陆剪成2-3段，用95％的乙醇溶液浸泡；

 ② 用旋转蒸发仪将乙醇除去，加入正丁醇溶液，反复提取，获得符合正丁醇极性的粗提取物；

 ③ 将正丁醇提取物取出单独放入干净的锥形瓶中；

 ④ 蒸干余留下的不溶物，除尽正丁醇溶液，加入乙酸乙酯，反复提取后获得符合乙酸乙酯极性阶段的粗提取物；

 ⑤ 将乙酸乙酯粗提取物吸出，放入干净的锥形瓶中；

 ⑥ 蒸干余下的不溶物，除尽乙酸乙酯溶液，加入石油醚，反复提取后获得极性最小的粗提取物；

 ⑦ 蒸干不溶物，回收石油醚试剂，并妥善处理残渣。

2、乙酸乙酯粗提取物的分离与提纯

1）SiO₂柱层析

①将乙酸乙酯粗提取物加入硅胶，拌样，用旋转蒸发仪蒸干，使其能够吸附在填料上；

②将样品加入准备好的硅胶柱中，采用氯仿甲醇梯度洗脱的方式，通过不断的改变极性的大小达到分离纯化的效果，首先使用纯氯仿洗脱，然后不断加大甲醇的量，直到氯仿：甲醇=2：1；

③将不同色段的液体分开接到事先备好的干净的锥形瓶中，使用旋转蒸发仪蒸干，加入适量的氯仿甲醇混合物溶解，将液体吸入干净的小玻璃瓶中使其静置析晶；

④重复步骤③直到整根硅胶柱上的样品完全洗脱下来，；

⑤将锥形瓶内所接的样品，用旋转蒸发仪缩小体积，按照蒸发的先后顺序依次加入到小玻璃瓶中；

⑥将装有样品的小玻璃瓶编号，按照次序排列；

⑦用玻璃毛细管吸取少量样品，在SiO₂板上点样，用氯仿甲醇展开剂展开，并在荧光灯下观察；

⑧然后用10％的硫酸溶液浸湿，酒精灯加热使显色；

⑨具有相同或相似的点的样品合并。

2）RP-C18柱层析

①将合并后的样品按照点的不同，分别加入单独的RP-C18柱；

②加入甲醇与水的混合物梯度洗脱；

③重复②步骤直到整根硅胶柱上的样品完全洗脱下来，用锥形瓶接样；

④将锥形瓶内所接的样品，用旋转蒸发仪缩小体积，按照蒸发的先后顺序依次加入到小玻璃瓶中；