⑤将装有样品的小玻璃瓶编号,按照顺序排列;
⑥用玻璃毛细管吸取少量样品,在ods板上点样,用甲醇水展开剂展开,并在荧光灯下观察;
⑦然后用10%的硫酸溶液浸湿,酒精灯加热使显色;
⑧将具有相同或相似的点的样品合并。
3)Sephadex LH20柱层析
①将合并后的样品按照点的不同,分别加入不同的Sephadex LH20柱;
②按照相同的体积用锥形瓶接样;
③将锥形瓶内所接的样品,用旋转蒸发仪缩小体积,按照蒸发的先后顺序依次加入到小玻璃瓶中;
④将装有样品的小玻璃瓶编号,按照顺序排列;
⑤用玻璃毛细管吸取少量样品,在SiO₂板上点样,用二氯甲烷和甲醇的混合物展开,并在荧光灯下观察;
⑥然后用10%的硫酸溶液浸湿,酒精灯加热使显色;
⑦将具有相同或相似的点的样品合并。
4)静置析晶
①将编号完毕的小玻璃瓶呈螺旋状排列在一个圆形玻璃盘内,静置,等待晶体的析出;
②将析出晶体的小玻璃瓶小心拿出,用胶头滴管吸去养晶液;
③用胶头滴管加晶体吸出,放在滤纸上,进一步将养晶液吸干;
④晶体干燥,将干燥后的晶体用小勺挖入核磁管中,加入适量氘代氯仿,使晶体溶解;
⑤将装有晶体溶液的核磁管插入核磁共振仪中,并用核磁共振仪进行分析;
⑥导出数据,分析晶体结构;
3、正丁醇提取物的分离与纯化
1)SiO₂柱层析
①将正丁醇提取物加入硅胶,拌样,用旋转蒸发仪蒸干,使其能够吸附在填料上;
②将样品加入准备好的硅胶柱中,采用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱的方式,通过不断的改变极性的大小达到分离纯化的效果,首先使用纯二氯甲烷洗脱,然后不断加大甲醇的量,直到二氯甲烷:甲醇 =2:1;
③将不同色段的液体分开接到事先备好的干净的锥形瓶中,使用旋转蒸发仪蒸干,加入适量的二氯甲烷-甲醇混合物溶解,将液体吸入干净的小玻璃瓶中使其静置析晶;
④重复③步骤直到整根硅胶柱上的样品完全洗脱下来;
⑤将锥形瓶内所接的样品,用旋转蒸发仪缩小体积,按照蒸发的先后顺序依次加入到小玻璃瓶中;
⑥将装有样品的小玻璃瓶编号,按照次序排列;
⑦用玻璃毛细管吸取少量样品,在SiO₂板上点样,用氯仿甲醇展开剂展开,并在荧光灯下观察;
⑧然后用10%的硫酸溶液浸湿,酒精灯加热使显色;
⑨具有相同或相似的点的样品合并。文献综述
2)ODS柱层析
①将合并后的样品按照点的不同,分别加入单独的ODS柱;
②加入甲醇与水的混合物梯度洗脱;
③重复②步骤直到整根硅胶柱上的样品完全洗脱下来,用锥形瓶接样;
④将锥形瓶内所接的样品,用旋转蒸发仪缩小体积,按照蒸发的先后顺序依次加
入到小玻璃瓶中;
⑤将装有样品的小玻璃瓶编号,按照顺序排列;
⑥用玻璃毛细管吸取少量样品,在ods板上点样,用甲醇水展开剂展开,并在荧光灯下观察;
⑦然后用10%的硫酸溶液浸湿,酒精灯加热使显色;
⑧将具有相同或相似的点的样品合并。
3)静置析晶
①将编号完毕的小玻璃瓶呈螺旋状排列在一个圆形玻璃盘内,静置,等待晶体的析出;
②将析出晶体的小玻璃瓶小心拿出,用胶头滴管吸去养晶液;
③用胶头滴管加晶体吸出,放在滤纸上,进一步将养晶液吸干;