2。2。6  除臭菌的初筛

分离得到的菌株,放置于28℃恒温培养箱中培养5d。将50g猪粪加入500mL大烧杯中,接种10mL培养液至风干猪粪中,最后补充45mL蒸馏水,搅拌均匀,再将盛有20mL蒸馏水的50mL小烧杯放入500mL大烧杯中,用保鲜膜封口,30℃恒温培养,于5d、10d、15d后用感官法初步判定菌株除臭效果,并测20mL蒸馏水的pH值,记录数据,将除臭能力较强的菌株进行复筛试验[14]。

嗅阈值＝[测试样体积（ml）-无味水样体积（ml）]/ 测试样体积（ml）

2。2。7  除臭菌的复筛

臭气主要成分中的NH3和H2S主要采用臭气组分测定法：NH3采用硼酸吸收凯氏定氮法,H2S采用乙酸锌沉淀法。

3。  实验步骤

3。1。1  培养基制作

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制步骤：依次准确按比例称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl至烧杯,加入所需水量,在石棉网上加热溶解并用玻璃棒搅拌。全部溶解后补齐水分,调节pH至7。6,分装入三角烧瓶内加塞、包扎后进行高压蒸汽灭菌。将灭菌的培养基放入37℃恒温培养箱中。

改良高氏一号培养基配制步骤：在烧杯中加入80毫升的水至沸腾后加入2克淀粉，加入5毫升水搅拌成糊状至均匀。再称取其它药品，陆续加入烧杯内。待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7。3。分装后，高压蒸汽灭菌。文献综述

3。2。2  除臭菌分离

除臭菌的分离采用平板划线分离法[19]

（1）倒平板溶化牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒平板，水平静置待凝。

（2）在酒精灯光焰上灼烧接种环，待冷，取一接种环金黄葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液。

（3）左手握琼脂平板稍抬起皿盖，同时靠近火焰周围，右手持接种环伸入皿内，在平板上一个区域作之形回划线，划线时例接种环与平板表面成30角度轻轻接触，以腕力在表面作轻快的滑动，勿使平板表面划破或嵌进增基内。

（4）接种环酒精灯灼烧，杀灭残留菌体，冷却后再将接种环伸入皿内，在第一区域划线处接触后，直角转弯，在第二区域继续划线。

（5）划毕后再灼烧接种杯，冷却后用同样方法在其他区域划线。

（6）全部划线完毕后，在平皿底用签字笔注明菌种、日期、组别、姓名。将整个培养皿倒置放入恒温箱培养。

（7）在36℃经过1d培养后取出观察菌落的大小、颜色、表面结构、透明度、边缘等各种性状。

3。3。3  试管种制作

将带棉花塞的试管、培养基、小漏斗、橡胶管夹子灭菌,在超净台分装,培养基从小漏斗倒进试管四分之一处,塞棉花塞,趁热斜放,用接种环挑取细菌并标记。每个菌种做三个重复试管,放置恒温培养箱中1d,控制温度在28摄氏度。

试管种3。3。4  感官法初筛

将50g风干猪粪加入1000mL大烧杯中,加入50mL水,121℃下灭菌30min,分别接入培养液,并充分混匀搅拌均匀,再将盛有30mL蒸馏水的50mL小烧杯放入1000mL大烧杯中,用保鲜膜密封,36℃恒温培养,用感官法初步判定菌株除臭效果,并测30mL蒸馏水的pH值,记录数据,将除臭能力较强的菌株进行复筛 [20]。

嗅阈值＝[测试样体积（ml）-无味水样体积（ml）]/ 测试样体积（ml）

3。3。5  臭气组分测定法复筛

将50g风干猪粪加入1000mL大烧杯中,加入50mL水,121℃下灭菌30min,分别接入10mL摇床培养好的初筛菌株,并充分混匀,每个大烧杯中放置1个装有20mL硼酸吸收液的50mL小烧杯,用以吸收NH3;用1个装有20mL乙酸锌溶液的50mL小烧杯吸收H2S。均以接种等量无菌水作为空白对照。保鲜膜密封,置于36℃恒温培养箱中培养,所有处理均做2个重复。以甲基红为指示剂,NH3释放量用硼酸吸收滴定法测定[21];用乙酸锌吸收,H2S用碘量法测定[22]。培养过程测三段时间，每隔5d检测氨气和硫化氢的释放量。来~自,优^尔-论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-