2 结果分析 8

2。1 ROS的活性分析 8

2。2线粒体膜电位（MMP）检测分析 9

2。3线粒体内Cyt C的释放 10

2。4 Metacaspase活性分析 11

2。5 TUNEL实验分析 12

3 讨论 13

4 致谢 15

参考文献 15

前言

近年来，由于免疫制剂、抗生素、激素的广泛地应用，临床上器官移植的治疗手段使用，而引起的免疫抑制的增加，条件真菌感染的发病率和死亡率呈不断升高的趋势[1]。

念珠菌(Candida)是常见的病原真菌，在正常情况下，属于人类正常菌群的一部分，当人体的免疫机能低下时，寄生的念珠菌就易产生致病性。念珠菌属包括光滑念珠菌(Candida glabrate)、热带念珠菌(Candida tropicalis)、白色念珠菌(Candida albicans)等 [2~3]。白色念珠菌(C。albicans)，又名白色假丝酵母菌，酵母科念珠菌属，是常见的条件致病性真菌[4]。可寄生在人类的皮肤和粘膜，机体内的平衡状态一旦被某些因素所破坏，C。albicans便出芽生成菌丝繁殖后，会导致皮肤、黏膜和全身性的真菌病[5]，根据统计我们国家的真菌感染发病率已达14。0 %[6]。C。albicans是一个著名的酵母模型系统，在研究高等真核生物细胞程序性死亡中，作为最普遍的系统性真菌病原体，所导致的念珠菌病，其死亡率可高达47 %。

近年，用于治疗C。albicans的药物主要分为三类：唑类、多烯类和棘球白素类[7]，但在临床上的长期使用，以及抗真菌药物使用的局限性，产生了真菌的耐药性，因此,抗真菌药物的改良、新型药物的开发是非常重要的[8]。挥发油是从植物次级代谢中提取出的，挥发油可以作为一种天然的抗菌物质，萜烯类化合物是其最主要的成分，据统计，现在可以提取到约有3000多种挥发油，其中300多种已开发成产品[9]。有报道曾说明橙花醇挥发油对C。albicans具有很强的抑制作用[10]。论文网

橙花醇，为无色油状液体，香气柔和，绿色安全，并具新鲜柑橘香调。橙花醇是一种贵重的香料和医药中间体[11]，可作为香料在饮食、食品、高档香精的调配中被广泛使用，FEMA公布了橙花醇的编号为2770，2003年，JECFA对橙花醇进行评价，认为作为食用香料橙花醇具有安全性，橙花醇JECFA编号是1224[12]。橙花醇可以从天然植物中提取得到，比如芸香科植物甜橙、佛手、忍冬，也可以通过化学合成的方法，比如氢碘酸可以与香叶醇发生化学反应，可得到有香叶醇的混合物，用水蒸气蒸馏，即可得到橙花醇挥发油成品。

细胞凋亡(apoptosis)是指为维持内环境的稳定，在基因的调控下，细胞会自发有序进行死亡，并涉及基因的激活和表达等作用，细胞凋亡是为了适应生存，一种主动死亡的过程[13]。在此研究中，为了确认橙花醇的抗真菌属性和作用方式，我们主要观察C。albicans的形态和生理变化。我们研究发现由橙花醇引起细胞凋亡特征，包括ROS积累、线粒体膜超极化、Cyt C的释放、Metacaspase激活、DNA核断裂等。线粒体是细胞内非常重要的细胞器官，能够合成ATP提供能量，同时ROS产生的场所为线粒体。ROS包括过氧化氢、羟自由基(OH)等，一般来说，ROS的生成是细胞早期凋亡的标志，类似于哺乳动物的细胞凋亡。ROS或低浓度的过氧化氢是调节在酵母细胞凋亡过程中的关键，ROS可以损伤几乎每个重要细胞成分包括蛋白质、脂质、DNA和细胞骨架[14]。DCFH-DA可捕获活性氧，用流式细胞仪可以测定细胞内荧光强度，根据荧光的强度反映细胞内自由基的变化程度[15]。